Avaliação da imunogenicidade e eficácia da imunização utilizando Leishmania infantum viva atenuada pela deleção do gene KHARON1 contra a Leishmaniose Visceral no modelo Hams.

Abstract

Historicamente, a leishmanização, que consiste no inoculo de parasitos vivos na pele, foi a única estratégia bem-sucedida para imunização contra leishmaniose cutânea. Com os avanços nas técnicas moleculares, tornou-se possível selecionar parasitos vivos atenuados, não patogênicos, que apresentam ampla variedade antigênica, induzindo imunidade protetora de forma mais segura e duradoura. A deleção do gene KHARON 1 em Leishmania infantum resultou em uma cepa atenuada (LiKH) que pôde infectar camundongos e desencadear uma resposta imune robusta com controle do parasitismo. No presente estudo, avaliamos esta cepa em hamsters, a fim de determinar sua imunogenicidade e eficácia vacinal em um modelo mais representativo da doença. Os animais foram divididos em grupos que receberam uma ou duas doses da imunização pela via subcutânea ou intradérmica, estes foram avaliados um mês pós imunização e um e oito meses pós desafio com promastigotas virulentas de L. infantum. Nossos resultados indicam que a resposta humoral nos animais imunizados apresentou maior estimulação na produção sérica de IgG total e IgG2, sendo a última imunoglobulina produzida em maior quantidade em todos os grupos imunizados. A resposta humoral se manteve neste perfil após o desafio experimental, com elevada produção das duas imunoglobulinas testadas. A imunização com a cepa deficiente em KH1 induz uma resposta celular mista caracterizada pela produção de citocinas pró- inflamatórias e anti-inflamatórias, tanto pela avaliação por citometria de fluxo quanto pela qRTPCR. Os hamsters imunizados apresentaram maior porcentagem de linfócitos (totais e CD4+ ) produtores de IFN- em comparação aos hamsters não imunizados e desafiados. Em relação à citocina IL-10, foi observada redução na porcentagem de linfócitos produtores dessa citocina em todos os animais imunizados e desafiados. A expressão gênica de diferentes alvos imunológicos (TGF-, TNF, IL- 1, IFN- e IL10) indica uma forte estimulação pós-imunização nos grupos que receberam os parasitos LiKH pela via subcutânea, enquanto a avaliação 8 meses pós- desafio, indica o aumento da expressão de todas as citocinas nos grupos intradérmicos. Além disso, em ambos momentos pós-desafio (1 e 8 meses) observamos a redução da carga parasitária hepática nos grupos que receberam duas doses em ambas as vias. Os animais que receberam duas doses por via subcutânea também apresentaram menor carga parasitária esplênica quando comparado ao grupo controle tanto um quanto oito meses pós-desafio. Nosso estudo indica que a imunização com LiKH foi potencialmente imunogênica, resultando na estimulação mista da resposta imune (Th1/TH2), promovendo o controle da infecção e destacando- a como uma estratégia imunoprofilática promissora.