Detecção e caracterização de Rickettsia spp. circulante em foco inativo peri-urbano do município de Caratinga, MG

Abstract

As riquétsias patogênicas constituem um grupo de bactérias gram-negativas, intracelulares obrigatórias responsáveis por várias doenças humanas conhecidas como riquetsioses, as quais são transmitidas ao homem através da picada de artrópodes hematófagos como carrapato, pulga e piolho. O Brasil apresenta histórico de doença riquetsial desde o final da década de 20, sendo a febre maculosa brasileira a mais severa das riquetsioses descritas, com inúmeros casos confirmados através de sorologia no sudeste do país. A introdução de técnicas da biologia molecular no estudo das riquétsias tem possibilitado a caracterização de espécies já existentes como a Rickettsia rickettsii, bem como a descrição de novas espécies tais como a Rickettsia felis. O presente trabalho teve por objetivo detectar a presença de Rickettsia spp. circulante em artrópodes vetores em um foco inativo peri–urbano do município de Caratinga, MG, através da reação em cadeia da polimerase e avaliar o nível de transmissão de riquetsioses na população animal do domicílio e peri–domicílio. 2610 ectoparasitos, em fase parasitária, foram coletados entre maio/2002 e abril/2003, taxonomicamente identificados, agrupados de acordo com estádio evolutivo e animal de origem e submetidos à extração de DNA pelo método do fenol/clorofórmio. O DNA extraído foi amplificado por meio de uma PCR duplex contendo dois pares de oligonucleotídeos iniciadores gênero específicos: citrato sintase - gltA (RpCS877p; RpCS1258n) e 17 KDa(17kDa F; 17kDa R), sendo o produto obtido reamplificado com um par de iniciadores internos do gene que codifica a proteína interna de membrana de 17kDa (full nested PCR). Os produtos amplificados foram visualizados em gel de poliacrilamida 8% corado pela prata e as amostras positivas foram clonadas, purificadas, seqüenciadas, editadas e comparadas com outras seqüências depositadas no GenBank utilizando os programas Chromas e BLASTn. Alternativamente, produtos de PCR’s positivas foram purificados e diretamente seqüenciados. Foram também coletadas 73 amostras de soro canino e 18 amostras de soro eqüino por venocentese da cefálica e da jugular, respectivamente, sendo estas submetidas à reação de imunofluorescência indireta usando antígeno específico de R. rickettsii. A análise das seqüências obtidas de pools de pulgas do gênero Ctenocephalides e de pools de carrapatos das espécies Amblyomma cajennense e Rhipicephalus sanguineus permitiu a identificação de riquétsias com 100% de homologia com R. felis e 97% de homologia com Rickettsia honei e R. rickettsii, simultaneamente. Nenhum dos soros caninos analisados apresentou resultado positivo à RIFI enquanto 3 dos soros eqüinos (17%) apresentaram-se positivos nos título 1:64 e 1:128. Os dados obtidos mostram que o foco estudado representa uma região vulnerável com relação à transmissão de riquetsioses, fazendo-se necessário o estabelecimento de um sistema de vigilância epidemiológica no referido local.