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Title: Kinetic characterization and inhibition of the rat MAB elastase-2, an angiotensin I-converting serine protease.
Authors: Santos, Carlos F.
Paula, Carmem Aparecida de
Salgado, Maria Cristina de Oliveira
Oliveira, Eduardo Brandt de
Keywords: Angiotensin
Elastase-2
Chymase
Issue Date: 2002
Citation: SANTOS, C. F. et al. Kinetic characterization and inhibition of the rat MAB elastase-2, an angiotensin I-converting serine protease. Canadian Journal of Physiology and Pharmacology, v. 80, p. 42-47, 2002. Disponível em: <https://goo.gl/P83ytx>. Acesso em: 10 nov. 2016.
Abstract: An elastase-2 has been recently described as the major angiotensin (Ang) II-forming enzyme of the rat mesenteric arterial bed (MAB) perfusate. Here, we have investigated the interaction of affinity-purified rat MAB elastase-2 with some substrates and inhibitors of both pancreatic elastases-2 and Ang II-forming chymases. The Ang II precursor [Pro11-D-Ala12]-Ang I was converted into Ang II by the rat MAB elastase-2 with a catalytic efficiency of 8.6 min–1·mM–1, and the chromogenic substrates N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Leu-p-nitroanilide and N-succinyl-Ala-Ala-Pro- Phe-p-nitroanilide were hydrolyzed by the enzyme with catalytic efficiencies of 10.6 min–1·mM–1 and 7.6 min–1·mM–1, respectively. The non-cleavable peptide inhibitor CH-5450 inhibited the rat MAB elastase-2 activities toward the substrates Ang I (IC50 = 49 mM) and N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide (IC50 = 4.8 mM), whereas N-acetyl-Ala- Ala-Pro-Leu-chloromethylketone, an effective active site-directed inhibitor of pancreatic elastase-2, efficiently blocked the Ang II-generating activity of the rat MAB enzyme (IC50 = 4.5 mM). Altogether, the data presented here confirm and extend the enzymological similarities between pancreatic elastase-2 and its rat MAB counterpart. Moreover, the thus far unrealized interaction of elastase-2 with [Pro11-D-Ala12]-Ang I and CH-5450, both regarded as selective for chymases, suggests that evidence for the in vivo formation of Ang II by chymases may have been overestimated in previous investigations of Ang II-forming pathways.
metadata.dc.description.abstracten: De récents travaux ont identifié une élastase-2 comme principale enzyme de production de l’angiotensine (Ang) II dans le perfusat du lit artériel mésentérique (LAM) du rat. Dans la présente étude, nous avons examiné l’interaction entre l’élastase-2 du LAM du rat, purifiée par affinité, et quelques substrats et inhibiteurs des élastases-2 pancréatiques et des chymases produisant l’Ang II. Le précurseur [Pro11-D-Ala12]-Ang I de l’Ang II a été converti en Ang II par l’élastase-2 du LAM du rat avec une efficacité catalytique de 8,6 min–1·mM–1, et les substrats chromogènes, N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Leu-p-nitroanilide et N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide, ont été hydrolysés par l’enzyme avec des efficacités catalytiques de 10,6 min–1·mM–1 et 7,6 min–1·mM–1, respectivement. L’inhibiteur peptidique non clivable, CH-5450, a inhibé les activités de l’élastase-2 du LAM du rat envers les substrats Ang I (IC50 = 49 mM) et Nsuccinyl- Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide (IC50 = 4,8 mM), alors que le N-acétyl-Ala-Ala-Pro-Leu-chlorométhylcétone, un inhibiteur du site actif des élastases-2 pancréatiques, a bloqué efficacement la production d’Ang II par l’enzyme du LAM (IC50 = 4,5 mM) du rat. Les résultats présentés dans cet article confirment et augmentent les similarités enzymologiques entre les élastases-2 pancréatiques et leur homologue du LAM du rat. De plus, l’interaction encore latente entre l’élastase-2 et le [Pro11-D-Ala12]-Ang I ainsi que le CH-5450, tous deux considérés comme sélectifs des chymases, donne à penser que les données sur la production in vivo d’Ang II par les chymases pourraient avoir été surestimées dans les études antérieures des voies de production de l’Ang II.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/8900
metadata.dc.identifier.uri2: https://goo.gl/P83ytx
ISSN: 12057541
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