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Title: Obtenção e seleção de segregantes através da técnica BSA - bulk segregants analysis com maior ativação da H+-ATPase de membrana citoplasmática a partir de linhagem Saccharomyces cerevisiae PJ694a.
Authors: Barbosa, Patrícia Gonçalves Prates
metadata.dc.contributor.advisor: Brandão, Rogélio Lopes
Saraiva, Margarete Alice Fontes
Keywords: Saccharomyces cerevisiae
Mapeamento cromossômico humano
Issue Date: 2016
metadata.dc.contributor.referee: Castro, Ieso de Miranda
Fietto, Luciano Gomes
Brandão, Rogélio Lopes
Citation: BARBOSA, Patrícia Gonçalves Prates. Obtenção e seleção de segregantes através da técnica BSA - Bulk segregants analysis com maior ativação da H+-ATPase de membrana citoplasmática a partir de linhagem Saccharomyces cerevisiae PJ694a. 2016. 75 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2016.
Abstract: A H+-ATPase de membrana citoplasmática de Saccharomyces cerevisiae mantem o gradiente eletroquímico necessário para o transporte de íons, de nutrientes essenciais e pelo controle do pH interno. A ativação da H+-ATPase da membrana citoplasmática em S. cerevisiae induzida pela glicose é dependente de cálcio e o metabolismo do fosfatidilinositol parece estar envolvida neste processo de ativação da enzima. A proteína Arg82 p é uma inositol quinase que tem como uma das suas funções fosforilar o inositol 1,4,5-trifosfato (IP3) em inositol 1,3,4,5-tetrafosfato (IP4) e inositol 1,3,4,5,6-pentafosfato (IP5) considerados importantes mensageiros na regulação da homeostase de Ca2+ citosólico. O mutante arg82 da linhagem de S. cerevisiae PJ69 apresenta uma atividade da H+-ATPase superior a linhagem selvagem, indicando uma relação da ausência dessa proteína com o aumento nas concentrações de IP3 e de cálcio citosólico com subsequente ativação da H+-ATPase. Curiosamente, esse efeito não é observado com o mesmo mutante obtido para a linhagem BY4742. Para estudar essa aparente contradição foram realizados cruzamentos o mutante arg82 do background PJ69 (apresentando maior ativação da Pma1 p induzida por glicose) e a estirpe selvagem do background BY4742 (com menor ativação da Pma1), com posterior seleção de segregantes que possuem os fenótipos similares ao da linhagem parental superior (arg82 do background PJ69). Após cruzamento dessas linhagens, 600 segregantes F1 foram testados quanto à suscetibilidade ao antibiótico higromicina e ao cloreto de lítio. Aproximadamente 34 segregantes que apresentaram comportamento similar ao parental superior foram selecionados para análise da acidificação induzida por glicose para confirmação da maior ativação da H+-ATPase induzida por glicose. Dentre esses segregantes, vinte com fenótipo superior podem ser utilizados para o mapeamento de QTLs relacionados à maior ativação da H+-ATPase induzida por glicose na linhagem S. cerevisiae PJ694a.
metadata.dc.description.abstracten: The plasma membrane H+-ATPase of Saccharomyces cerevisiae maintains the electrochemical proton gradient necessary for ion and essential nutrient transport and plays an important role in internal pH control. Glucose induced activation of plasma membrane H+-ATPase in the S. cerevisiae is dependent on calcium and it seems that the phosphatidylinositol metabolism could be involved in this activation process of enzyme. Arg82p is a multikinase inositol polyphosphate with functions of phosphorylate inositol 1,4,5-triphosphate (IP3) to inositol 1,3,4,5-tetraphosphate (IP4), and inositol 1,3,4, 5,6-pentaphosphate (IP5) that are important messengers in the regulation of cytosolic Ca2 + homeostasis. S. cerevisiae PJ69-4a strain with mutations in the ARG82 gene showed a higher activation of the H+-ATPase than the wild strain, indicating the possible relationship between the absence this protein and increasing of IP3 concentrations and cytosolic calcium with subsequently activation of the H+-ATPase. Intriguingly, the Euroscarf (BY4742) arg82Δ mutante presented different response. In order to study this contrary response, it was carried out cossing between the S. cerevisiae PJ69-4a, superior parental strain (with increased glucose induced activation of Pma1 p) and S. cerevisiae BY4742 (inferior parental strain) with subsequent selection of segregants that showed good phenotypes similar the superior parental strain. After crossing of these strains, the 600 segregants (F1) were tested for susceptibility to hygromycin B and lithium chloride. Approximately 34 segregants that showed profile similar to the superior parental strain were selected to analysis of acidification-induced glucose for confirmation of the activation of plasma membrane H+-ATPase. Among these segregants twenty with superior phenotype may be used for mapping QTL related to higher glucose induced activation of plasma membrane H+-ATPase in the S. cerevisiae strain PJ69-4a.
Description: Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/7063
metadata.dc.rights.license: Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 01/10/2016 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite o uso para fins comerciais nem a adaptação.
Appears in Collections:PPCBIOL - Mestrado (Dissertações)

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