Desenvolvimento de sistema de diagnóstico de dengue utilizando nanopartículas de ouro.

Abstract

A Dengue é transmitida pelo mosquito Aedes Aegypti e é causada pelo Dengue vírus da família Flaviviridae. É conhecida como a arbovirose mais importante da atualidade, colocando aproximadamente metade da população mundial em áreas de risco iminente de transmissão. A ausência de vacinas eficazes e tratamentos específicos pra Dengue tornam necessário um diagnóstico precoce e preciso para esta doença, possibilitando assim, a clínica adequada e oportunas intervenções para prevenir a morbidade grave e a mortalidade. Neste contexto, novos materiais com propriedades químicas e físicas peculiares, tais como nanopartículas de ouro (AuNPs) têm sido utilizadas como biomarcadores. Estas nanopartículas têm propriedades físico-químicas únicas, tal como a oscilação coletiva dos elétrons chamada de ressonância plasmônica, que podem ser facilmente ajustadas. Assim, a detecção de biomoléculas como proteínas e anticorpos ligados às AuNPs pode ser feita a partir do seu espectro de absorção. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi desenvolver e analisar a eficácia de metodologias de funcionalização de nanopartículas com anticorpos específicos anti-DENV e anti-flavivirus e a ligação dos mesmos aos antígenos. Para isso, imunoglobulinas foram purificadas por coluna de afinidade e, inicialmente, as nanopartículas de ouro (AuNPs) foram testadas para determinação da melhor concentração de uso dos reagentes: cisteamina (0,5mM) e polietilenoimina (0,3%) e de anticorpos (0,4μg/ml) a serem utilizados. Os resultados foram analisados através da leitura de sua ressonância de plasmon em espectrômetro de varredura UV-Vis e um deslocamento no comprimento de onda foi observado a cada funcionalização, se comparado com AuNPs não funcionalizados e caracterizados anteriormente. Quando as AuNPs foram incubadas em solução com Dengue virus foi possível observar um forte deslocamento nos primeiros minutos de contato. Mas quando incubados com Mayaro virus (Alfavirus) o deslocamento foi observado apenas na presença de alta concentração do vírus, que não é encontrada em amostras naturais, demonstrando a especificidade dos anticorpos utilizados. Assim, sugere-se que as nanopartículas de ouro podem ser utilizadas para um diagnóstico de baixo custo de produção e ser ainda mais rápido, preciso e prático que as técnicas já existentes.