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Title: Recrutamento do receptor de adenosina A2B e ativação da via de AMPc- PI3K-ERK1/2 inibem a resposta de células dendríticas infectadas por Leishmania amazonensis.
Authors: Figueiredo, Amanda Braga de
metadata.dc.contributor.advisor: Afonso, Luís Carlos Crocco
Gonçalves, Teresa Maria Fonseca de Oliveira
Cunha, Rodrigo Pinto dos Santos Antunes da
Keywords: Adenosina
Leishmania
Células imunocompetentes
Issue Date: 2016
metadata.dc.contributor.referee: Brandão, Rogélio Lopes
Oliveira, Milton Adriano Pelli de
Faria, Ana Maria Caetano de
Antonelli, Lis Ribeiro do Valle
Citation: FIGUEIREDO, Amanda Braga de. Recrutamento do receptor de adenosina A2B e ativação da via de AMPc- PI3K-ERK1/2 inibem a resposta de células dendríticas infectadas por Leishmania amazonensis. 2016. 128 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Instituto de Ciências Exatas e Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2016.
Abstract: A infecção por Leishmania pode resultar num amplo espectro de manifestações clínicas e a infecção por Leishmania amazonensis é associada a uma deficiência na resposta de linfócitos T específicos para o parasito. Células dendríticas direcionam a diferenciação de linfócitos Th1 que contribuem para o controle da infecção por Leishmania. Em um trabalho anterior, nós mostramos que a infecção por L. amazonensis, mas não por L. braziliensis ou L. major, prejudica a resposta de células dendríticas por um mecanismo dependente do receptor de adenosina A2B. Neste trabalho, nós avaliamos a expressão de receptores de adenosina e os eventos intracelulares ativados a partir do receptor A2B em células dendríticas infectadas, bem como o papel desses eventos na infecção de camundongos por L. amazonensis. Inicialmente, células dendríticas derivadas de células de medula óssea de camundongos C57BL/6J foram infectadas por promastigotas metacíclicas de L. amazonensis, L. braziliensis ou L. major. Imagens obtidas por microscopia de fluorescência mostraram que a infecção por promastigotas metacíclicas de L. amazonensis estimula a redistribuição do receptor A2B para a superfície de células dendríticas infectadas, sem alterar a quantidade total do receptor, avaliada por western blotting, nem a expressão dos receptores de adenosina A1, A2A e A3. A infecção por L. braziliensis, L. major ou promastigotas procíclicas de L. amazonensis não alteram a expressão do receptor A2B em células infectadas. Nossos resultados mostraram, ainda, que a infecção por L. amazonensis estimula a produção de AMPc e a fosforilação de ERK1/2 por mecanismos dependentes do receptor A2B. Além disso, L. amazonensis prejudica a expressão de CD40 e a produção de IL-12p70 por células dendríticas, efeitos independentes de IL-10 e revertidos pela inibição de adenilato ciclase, de PI3K e da fosforilação de ERK1/2. Por fim, camundongos infectados na orelha por L. amazonensis na presença de inibidores do receptor A2B ou das proteínas PI3K ou ERK1/2 desenvolvem lesões menores se comparados a animais controles, mas apenas o bloqueio do receptor A2B é capaz de diminuir o parasitismo tecidual. Concluindo, nós propomos um novo mecanismo utilizado por L. amazonensis (redistribuição do receptor A2B AMPc PI3K ERK1/2) para inibir a ativação de células dendríticas, que parece ser importante para a deficiência na resposta imune observada na infecção por essa espécie de parasito.
metadata.dc.description.abstracten: Leishmania infection can result in a wide spectrum of clinical manifestations and L. amazonensis is associated with a lack of antigen-specific T-cell responses. Dendritic cells direct the differentiation of T-helper 1 lymphocytes that contribute to the control of Leishmania infection. In a previous work, we showed that infection by L. amazonensis, but not by L. braziliensis or L. major, impairs dendritic cells responses by activating adenosine A2B receptors. Here, we evaluated the expression of adenosine receptors and the intracellular events triggered by A2B receptor in infected cells. Furthermore, we evaluated the role of these intracellular events in L. amazonensis-infected mice. With this aim, bone marrow-derived dendritic cells from C57BL/6J mice were infected with metacyclic promastigotes of either L. amazonensis, L. braziliensis or L. major. Fluorescence microscopy revealed that L. amazonensis infection stimulates the redistribution of A2B receptor to the surface of infected dendritic cells, without altering total A2B receptor protein density, as gauged by Western blotting, nor the expression of A1, A2A or A3 adenosine receptors. We also report that L. amazonensis increases cAMP production and ERK1/2 phosphorylation in infected dendritic cells by a mechanism dependent on A2B receptor. Furthermore, L. amazonensis infection impairs CD40 expression and IL-12 production by dendritic cells, an IL-10-independent effect prevented by the inhibition of adenylate cyclase, PI3K or ERK1/2 phosphorylation. Finally, mice infected in ear with L. amazonensis in the presence of inhibitors of A2B receptor, PI3K or ERK1/2 develop smaller lesions if compared with control animals, but only A2B receptor blockade decreases tissue parasitism. In conclusion, we propose a new pathway used by L. amazonensis (A2BR redistribution cAMP PI3K ERK1/2) to suppress dendritic cells activation, which may contribute to the pronounced deficiency of immune response elicited against this parasite infection.
Description: Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2016.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/6426
metadata.dc.rights.license: Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 14/04/2016 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite a adaptação.
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