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Title: Perfil de citocinas, linfócitos T e níveis de óxido nítrico em cães imunizados com as vacinas LBSap e LBSapSal e submetidos ao desafio experimental com Leishmania (Leishmania) chagasi e saliva de Lutzomyia longipalpis.
Authors: Resende, Lucilene Aparecida
metadata.dc.contributor.advisor: Giunchetti, Rodolfo Cordeiro
Keywords: Citocinas
Cães - vacinação
Leishmania
Leishmaniose visceral canina
Linfócitos
Issue Date: 2011
Publisher: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Citation: RESENDE, L. A. Perfil de citocinas, linfócitos T e níveis de óxido nítrico em cães imunizados com as vacinas LBSap e LBSapSal e submetidos ao desafio experimental com Leishmania (Leishmania) chagasi e saliva de Lutzomyia longipalpis. 2011. 95 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2011.
Abstract: Os cães representam o reservatório doméstico mais importante de L. chagasi (sin. L. infantum), e uma vacina contra leishmaniose viscer al canina (LVC) pode ser uma importante ferramenta para o controle da leishmanio se visceral humana (LV). Além disso, para a obtenção de uma vacina efetiva, é fundamental o entendimento de eventos relacionados à imunogenicidade após a vacinação e desafio co m o agente etiológico para que seja definida a resposta imune associada à proteção contra a infecção por Leishmania. Assim, neste trabalho foi verificada a imunogenicidade e proteção conferida pela vacinação de cães contra LVC com os imunobiológicos LBSap e LBSapSal. Desta forma, trinta e cinco cães sem raça definida foram distribuídos em sete grupos experimentais, entre os quais: (i) grupo controle C (n = 5) que recebeu 1 mL de salina estéril a 0,9%; (ii) grupo LB (n = 5) que recebeu 600 μg de proteína de Leishmania braziliensis em 1 mL de salina estéril a 0,9%; (iii) grupo Sap (n = 5) que recebeu 1 mg de saponina em 1 mL de salina estéril a 0,9%; (iv) grupo LBSap (n = 5) que recebeu 600 μg de proteína de L. braziliensis associado a 1 mg de saponina em 1 mL de salina estéril a 0,9%; (v) grupo Sal (n = 5) que recebeu extrato de glândula salivar de Lutzomyia longipalpis (SGE) equivalente ao conteúdo de 5 ácinos da glândula salivar em 1 mL de salina estéril a 0,9%; (vi) grupo LBSal (n = 5) que recebeu 600 μg de promastigotas de L. braziliensis associado ao SGE em 1 mL de salina estéril a 0,9%; (vii) grupo LBSapSal (n = 5) que recebeu 600 μg de promastigotas de L. braziliensis associado a 1 mg de saponina e ao SGE em 1 mL de salina estéril a 0,9%. Cada animal recebeu três aplicações subcutâneas no flanco esquerdo em intervalos de quatro semanas. Posteriormente, os cães foram infectados por via intradérmica com 1x10 7 promastigotas de Leishmania (Leishmania) chagasi na presença de saliva de L. longipalpis, sendo avaliados 90 e 885 dias pós desafio. Os níveis de óxido nítrico (NO) e citocinas (IL-4, IL-10, TGF-, TNF-, IL-12, IFN-) foram avaliados em sobrenadantes de cultura de células mononucleares do sangue periférico (CMSP) após estímulo com antígeno solúvel vacinal (VSA) ou antígeno solúvel de L. chagasi (SLcA). O grupo LBSap apresentou altos níveis de IL-4 (T3 e T90dpd), IL-10 (885dpd) e baixos níveis de TGF- (885dpd) após estímulo com antígenos de Leishmania. Além disso, o grupo LBSapSal apresentou baixos níveis de IL-4 (90dpd) e TGF- (90 e 885dpd) após estímulo com antígeno de Leishmania. Adicionalment e, altos níveis de IL-12 foram observados nos grupos LBSap e LBSapSal (T3, 90dpd e 885dpd). Da mesma forma, aumento dos níveis de IFN- foram observados nos grupos LBSap (T3, 90dpd e 885dpd) e LBSapSal (T3, 90dpd e 885dpd). O perfil de citocinas sugere que as vacinas LBSap e LBSapSal podem conferir imunidade protetora contra a infecção por Leishmania. Os resultados obtidos a partir da análise dos níveis de NO confirmaram a hipótese de que as estas vacinas induzem um perfil de resistência contra a infecção por Leishmania. Os principais resultados do presente estudo apontam para uma forte imunogenicidade induzida pela vacinação de cães com LBSap e LBSapSal e submetidos ao desafio experimental com L. chagasi, indicando uma ação destes imunobiológicos compatível com controle do parasito em cães. Novos estudos de avaliação da carga parasitária em medula óssea através da PCR em tempo real podem fornecer importantes informações para um melhor entendimento da eficácia das vacinas LBSap e LBSapSal.
metadata.dc.description.abstracten: Dogs represent the most important domestic reservoirs of L. chagasi (syn. L. infantum), and a vaccine against canine visceral leishmaniasis (CVL) would be an important tool in the control of human visceral leishmaniasis (VL) by decreasing dramatically the infect ion pressure of L. chagasi/L. infantum. Moreover, to obtain a successful vaccine, the understanding of immunogenicity mechanisms involved after vaccination and challenge is crucial to define the protective responses associated against Leishmania infection. Thus, in this work it was investigated the immunogenicity and protective effect of LBSap and LBSapSal vaccination in dogs. In this sense, thirty five mongrel dogs were treated within seven experimental groups as follow: (i) control group C (n = 5) received 1 mL of sterile 0.9% saline; (ii) LB group (n = 5) received 600 µg of Leishmania braziliensis promastigote protein in 1 mL sterile 0.9% saline; (iii) Sap group (n = 5) received 1 mg of saponin in 1 mL sterile 0.9% saline; (iv) LBSap group (n = 5) received 600 µg of L. braziliensis promastigote protein and 1 mg of saponin in 1 mL sterile 0.9% saline; (v) Sal group (n = 5) received sand fly gland extract (SGE) prepared from 5 acini of salivary glands of Lutzomyia longipalpis in 1 mL sterile 0.9% saline; (vi) LBSal group (n = 5) received 600 µg of L. braziliensis promastigote protein plus SGE in 1 mL sterile 0.9% saline; and (vii) the LBSapSal group (n = 5) received 600 µg of L. braziliensis promastigote protein plus 1 mg of saponin together with SGE in 1 mL sterile 0.9% saline. Each animal received three subcutaneous injections in the right flank at intervals of 4 weeks. Afterwards, the dogs were intradermally infected with 1×10 7 late-log-phase promastigotes of Leishmania (Leishmania) chagasi in the presence of sand fly saliva of L. longipalpis and follow-up at 90 and 885 days post challenge (dpc). Nitric oxide (NO) levels (determined as nitrite) and cytokines (IL-4, IL-10, TGF-, TNF-, IL-12, IFN-) were evaluated in culture supernatants of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) stimulated by vaccine soluble antigen (VSA) or soluble Leishmania chagasi antigen (SLcA). LBSap group displayed higher levels of IL-4 (T3 and 90dpi), IL-10 (885dpi) and lower levels of TGF- (885dpi) following Leishmania stimulation. Moreover, LBSapSal group presented lower levels of IL-4 (90dpi) and TGF- (90 and 885dpi) after Leishmania stimulation. In addition, higher levels of IL-12 were observed in LBSap and LBSapSal groups (T3, 90 and 885dpi). Likewise, increased levels of IFN- were related to LBSap (T3, 90 and 885dpi) and LBSapSal (T3, 90 and 885dpi) groups. The cytokines profile suggest that LBSap and LBSapSal vaccine have potential protective immunity against Leishmania infection. The results obtained from the analysis of NO levels confirmed the hypothesis that these vaccines induce a potential resistance profile against Leishmania infection. In conclusion, the major findings in the present study point to a strong immunogenicity elicited when dogs were vaccinated with LBSap or LBSapSal and submitted to experimental challenge indicating a compatible action of this immunobiological with the effective control of the parasitism in dogs. Further studies on bone marrow parasitism using real time PCR may provide important information that will lead to a better understanding on LBSap and LBSapSal efficacies.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/3245
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