Modificação pós-traducional dependente de SUMO em Schistosoma mansoni : padrão de expressão diferencial durante a transição cercária a esquistossômulo.

Abstract

A conjugação de SUMO aos substatos alvo ocorre através de um mecanismo análogo ao da ubiquitina, pela ação sequencial de três classes de enzimas: E1 ativadora (Aos1-Uba2), E2 conjugadora (Ubc9) e E3 ligases (PIAS, Polycomb2 e RanBP2). SUMO é sintetizada como um precursor inativo, que requer processamento por proteases específicas (SENPs). A conjugação de SUMO é uma modificação reversível e transitória. As mesmas enzimas que convertem SUMO em sua forma madura também catalisam a clivagem dos seus substratos. A reconstituição da via de sumorilação em Schistosoma mansoni, baseado em busca por homologia utilizando banco de dados disponíveis, mostra a existência de 9 genes envolvidos com esta via: dois genes para SUMO (Smsmt3b/c), um para E1 (Smaos1-uba2), um para E2 (Smubc9), dois para E3 (Smpias e Smranbp2) e dois para SENPs (Smsenp1/7). Neste trabalho, os níveis de expressão destes genes foram quantificados utilizando o método de qRT-PCR e RNA total obtidos a partir de cercária, verme adulto e esquistossômulos de 3,5 horas a 7 dias de cultivo in vitro (MTS). Os resultados evidenciaram um padrão de expressão gênica diferencial para todos os genes analisados. Vale ressaltar que os níveis de transcritos foram 3 vezes maiores em MTS-3,5h quando comparado com cercária e verme adulto. Os níveis de SmUbc9 foram analisados por Western blot, utilizando anticorpos policlonais específicos para a proteína de S. mansoni produzidos utilizando a proteína recombinante. Os resultados sugerem níveis equivalentes da SmUbc9 nos estágios analisados. O perfil de substratos sumorilados foi determinado utilizando a técnica de Western blot usando anti-SUMO. Foi observado um perfil estágio-específico de conjugados sumorilados e um aumento nos estágios iniciais do desenvolvimento dos esquistossômulos. Estes dados demonstram que os constituintes da via de sumorilação são diferencialmente expressos, sugerindo um perfil estágio-específico durante a transição cercária-esquistossômulo. Considerando que esta transição não é controlada por uma síntese real de proteínas, esses resultados em conjunto, sugerem que a via de modificação pós-traducional dependente de SUMO pode regular processos biológicos importantes durante esse período do ciclo biológico do parasito.