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dc.contributor.advisorBabá, Élio Hideopt_BR
dc.contributor.authorJeremias, Wander de Jesus-
dc.date.accessioned2013-04-08T15:07:29Z-
dc.date.available2013-04-08T15:07:29Z-
dc.date.issued2004-
dc.identifier.citationJEREMIAS, W. de J. Localização física do BAC clone AL 619337 no genoma de Schistosoma mansoni utilizando a técnica de FISH (fluorescence in situ hybridization). 2004. 44 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2004.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2718-
dc.description.abstractA Esquistossomose, também conhecida como “Bilharziose” ou, popularmente, “Barriga d’água” ou “Chistosa” é uma doença crônica e debilitante ou mesmo fatal em alguns casos, que afeta principalmente indivíduos em áreas rurais, sendo endêmica em países tropicais e subtropicais. È causada pelo platelminto trematódeo digenético Schistosoma mansoni. Devido a sua grande importância sócio-econômica da doença em países em desenvolvimento, foi montado um projeto para seqüenciamento e estudo do genoma de seu agente etiológico, o S. mansoni. A ênfase inicial do projeto foi dada na etapa de seqüenciamento de cDNA, devido à existência de poucos genes seqüenciados do parasita. Como parte deste projeto, iniciou-se a construção de um mapa físico do genoma do S. mansoni. E para a consolidação de tal mapa, a localização física de grandes fragmentos de DNA genômico clonados em vetores BAC e YAC no genoma do parasita por meio da técnica de FISH (“Fluorescence in situ Hybridization”) é de fundamental importância. Neste trabalho, o DNA do BAC clone AL619337, desde então denominado BAC2A, foi fisicamente localizado no genoma do S. mansoni por meio da técnica de FISH. Foi estabelecido como 28 dias o melhor tempo de infecção do caramujo hospedeiro para obtenção de maior número de células metafásicas do parasita por lâmina. Uma vez ajustada a concentração do fluoróforo PI com qual os cromossomos metafásicos do parasita foram contra corados e também do conjugado Avidina-FITC, o sinal de hibridização foi visualizado na região de transição entre eucromatina e heterocromatina do braço curto do cromossomo sexual W em todas as metáfases de fêmea observadas. Não foi observado sinal homólogo no outro cromossomo sexual Z, mostrando que o DNA localizado é específico de fêmeas de S. mansoni. Trabalhos desta natureza permitem obter informações sobre a estrutura do genoma. Tais informações associadas a outras referentes à função de determinado gene permitem responder questões determinantes na patologia causada por este importante parasita.pt_BR
dc.language.isopt_BRpt_BR
dc.publisherPrograma de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.pt_BR
dc.subjectSchistosoma mansonipt_BR
dc.subjectTécnica Fishpt_BR
dc.subjectEsquistossomosept_BR
dc.subjectBiologia molecularpt_BR
dc.titleLocalização física do BAC clone AL 619337 no genoma de Schistosoma mansoni utilizando a técnica de FISH (fluorescence in situ hybridization).pt_BR
dc.typeDissertacaopt_BR
dc.description.abstractenThe Schistosoma mansoni genome physical map is under construction and large DNA fragments localization by FISH is priority for this strategy. Therefore, little information about this respect is actually available. To contribute with this initiative, a BAC clone DNA was located on the S. mansoni genome by FISH technique in this work. The BAC DNA was labeled by the biotinylated 14-dCTP incorporation in a randomly primers amplification labeling system, using the Klenow polymerase. Cells on metaphase were recovered by dissection of the intramoluscan stage, secondary sporocyst. These were fixed and used to prepare slides containing metaphase spreads. The labeled BAC DNA was hybridized to the S. mansoni chromosomes and the slides were washed several times before to reveal the hybridization signal with an Avidin-FITC conjugated. Chromosomes were counter stained with Propidium Iodide in the anti fade solution, and the slides were covered and observed in an epi-fluorescent microscopy coupled to a digital camera to capture the images. C banding was performed to help in identifying and assembling the chromosomes. We were able to establish the better infection time of the snail that yielded good amounts of metaphase spreads. The PI and FITC fluorescence were adjusted too, according to the microscopy power of resolution.The main signal was observed in the heterochromatineuchromatin transition region of the chromosome W short arm in all female metaphases observed, but nether on the chromosome Z of the male metaphases, showing that the localized BAC clone contains a female specific DNA.With this work, we hope to contribute to the S. mansoni genome physical mapping, becoming an additional place to obtain DNA localization by FISH for this important worm. After the sequencing of the genome is finished, gaining knowledge of the sequences localization is an important step. It will help to associate the physical structure of genome and the functional data of the genes for better understanding different features related to the pathology caused for this important worm.-
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