Coexistência do complexo HsIV/U e do proteassoma 20S em Trypanosoma cruzi.

Abstract

Todas as células possuem processos específicos para degradar proteínas à aminoácidos livres, e assim, regular o proteoma. Proteases ATP- dependentes são geralmente complexos compartimentalizados, altamente regulados e formados por várias subunidades, cuja função requer energia proveniente da hidrólise de ATP. Dentre esses complexos compartimentalizados, podemos citar duas treoninas proteases, o complexo HslV/U e o proteassoma 20S. O Trypanosoma cruzi é um dos raros exemplos de organismos que apresentam genes para estes dois complexos proteolíticos. Neste estudo, nós utilizamos duas abordagens para inferir a coexpressão destes complexos em epimastigotas obtidos das populações Berenice 62, Berenice 78, Cl, Colombiana e Y do T. cruzi. Inicialmente, foi determinado o perfil de transcrição das subunidades constituintes do complexo HslV/U e das subunidades beta-1, -2 e -5 do proteassoma 20S utilizando a técnica de qRT-PCR. Os resultados mostraram que os níveis de mRNA para a subunidade HslV são em média duas vezes menor na população Be-78 quando comparado as demais. Por outro lado, o nível de transcrição para o gene da hslu não variou entre as populações analisadas. O perfil de expressão para os genes beta -1 e -5 não apresentaram variações significativas, entretanto, o gene beta -2 foi 4,5 vezes menos expresso em Be-62 quando comparado as demais populações analisadas. Posteriormente, avaliamos os níveis protéicos do complexo HslV/U e proteassoma 20S, utilizando anticorpos específicos para as subunidades HslV e alfa-7 do T. cruzi. Os resultados mostraram que a relação HslV/proteassoma segue dois perfis distintos: um para a população Y, que apresenta níveis equivalentes para essas duas proteases e outro para as populações Be-62, Be-78, Cl e Colombiana, com predominância do proteassoma 20S. Também foi verificada uma regulação ao nível traducional do proteassoma 20S em epimastigotas crescidos na presença de PSI, um inibidor especifico do proteassoma. Em conjunto, os resultados sugerem a coexistência das proteases HslV/U e proteassoma 20S em T. cruzi reforçando a idéia de que a proteólise não lisossomal, via mecanismos dependentes e independentes de ubiquitina tem um papel importante na biologia celular deste parasito.