Formas reduzidas de inibidor Bowman-Birk, biodisponibilidade em íleo isolado de camundongo e atividade no proteassoma.

Abstract

Os inibidores do tipo Bowman-Birk (BBI) são moléculas protéicas contendo dois domínios inibitórios distintos para enzimas semelhantes à tripsina e quimotripsina. O interesse por essa classe de inibidores decorre de estudos que mostram que o BBI possui efeito protetor no câncer induzido quimicamente e em leucoplasias humanas. Estudos prévios do nosso laboratório mostraram que o inibidor obtido da semente de Macrotyloma axillare (BBIM) apresentou uma distribuição muito limitada ao interior dos vasos sanguíneos, com pequena distribuição para os tecidos. As propriedades farmacocinéticas do BBIM, como distribuição e absorção, podem ser melhoradas com a redução do tamanho deste inibidor, o que seria vantajoso do ponto de vista terapêutico. Embora os mecanismos de proteção do BBI contra o câncer permaneçam por serem elucidados, descobertas recentes indicam que o proteassoma é um importante alvo intracelular desse inibidor. Desta forma, este trabalho tem como objetivo a obtenção de formas menores do BBI: peptídeos sintéticos correspondentes aos domínios inibitórios da tripsina e quimotripsina e o BBI natural da semente de M. axillare, fragmentado. Os peptídeos sintéticos SCTKSIPPQCY e SCTFSLPPQCYGGGGG com atividades antitripsina e antiquimotripsina, respectivamente, foram sintetizados em fase sólida e identificados por LCMS-IT-TOF. Os fragmentos do inibidor da semente de M. axillare foram obtidos a partir da hidrólise com ácido fórmico a 2% em microondas por 30 min a 800 W. O estudo da absorção intestinal foi realizado em segmento de íleo isolado de camundongo pela medida da atividade inibitória que transpõe a luz intestinal. Os resultados mostraram que os peptídeos sintéticos, possivelmente, foram em grande parte degradados com perda da atividade, atingindo biodisponibilidade de apenas 5%. Por outro lado, enquanto o inibidor intacto apresentou 40% de absorção, os fragmentos atingiram valores de absorção próximos a 100 %. As formas nativas e menores dos inibidores foram também testadas em preparações de proteassoma de íleo de camundongo. Os resultados para a atividade quimotripsina-símile do proteassoma mostraram que todas as preparações do BBI inibiram essa atividade, com exceção da cabeça antitripsina do BBIM fragmentado. Em contraste, a atividade caspase-símile foi ativada pela cabeça antitripsina do BBIM fragmentado e pelo peptídeo sintético antiquimotripsina. Não foi encontrada diferença estatística para alterações na atividadetripsina-símile do proteassoma ao se comparar as diferentes preparações de BBI. Concluímos com esse trabalho que os peptídeos sintéticos não representam uma boa alternativa para o aumento de biodisponibilidade, tendo em vista a instabilidade dos mesmos. Por outro lado, os fragmentos obtidos por hidrólise ácida do BBI mostraram biodisponibilidade 2.5 vezes maior do que aquela observada para o inibidor intacto. Finalmente, o perfil de atividade sobre o proteassoma mostrou um comportamento das formas reduzidas semelhante à molécula nativa, especialmente para a atividade quimotripsina-símile, sugerindo que essas preparações possam ter as mesmas propriedades antitumorais que a molécula íntegra, mas apresentando vantagens farmacocinéticas. Estudos posteriores visando determinar as atividades antitumorais dessas preparações e sobre a atividade endógena do proteassoma, auxiliarão na compreensão de mecanismos relacionados ao desenvolvimento do câncer.