Formação de inibidores Bowman Birk durante a germinação de Macrotyloma axillare.

Abstract

Diferentes frações de inibidores do tipo Bowmam-Birk foram isolados de sementes e cotilédones germinados por 120h da Macrotyloma axillare. Foram realizadas extrações em meio ácido com e sem a etapa de tratamento térmico. Os extratos foram fracionados por precipitação etanólica (fração 60-80%), cromatografia de troca catiônica (Ssepharose), cromatografia de troca aniônica (Q-sepharose) e fase reversa (HPLC). Verifica-se que o processo de tratamento térmico causa a alteração da amostra, sendo seu uso desaconselhado quando o objetivo é estudar o padrão nativo de tais moléculas na planta, pois leva ao desaparecimento das frações de inibidores com elevada densidade de carga. Tal fato foi observado tanto na semente quanto nos cotilédones do broto. Verifica-se que as frações de inibidores isoladas dos cotilédones apresentam um perfil de troca iônica diferente dos inibidores da semente, apresentando um maior número de frações, além de possuir, de forma geral, menores densidades de cargas. O processo de germinação leva ao aumento de atividade nas frações de inibidores, verificando um aumento cerca de cinco vezes na atividade específica dos inibidores presentes nos cotilédones comparando com aqueles da semente não germinada. De acordo com as análises dos espectros de massas verifica-se que os inibidores dos cotilédones apresentam massas moleculares menores que as massas dos inibidores da semente não germinada. Foi identificada a presença de serino proteases semelhantes à tripsina e quimotripsina tanto na semente e broto quando realizada extração em salina e sem o tratamento térmico. Por outro lado, observa-se que o tratamento térmico e a extração em meio ácido inativam tais atividades proteásicas do extrato da M. axillare.