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Title: Correlação da atividade do proteassoma, expressão de CD44 e enzimas proteolíticas em extratos intestinais de camundongos tratados com 1,2 dimetilhidrazina e inibidores Bowman-Birk.
Authors: Carli, Alessandra de Paula
metadata.dc.contributor.advisor: Andrade, Milton Hércules Guerra de
Keywords: Proteinase - inibidores
Enzimas proteolíticas
Câncer
Inibidores enzimáticos
Issue Date: 2011
Publisher: Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Citation: CARLI, A. de P. Correlação da atividade do proteassoma, expressão de CD44 e enzimas proteolíticas em extratos intestinais de camundongos tratados com 1,2 dimetilhidrazina e inibidores Bowman-Birk. 2011. 70 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2011.
Abstract: Os inibidores do tipo Bowman-Birk (BBI) são moléculas protéicas contendo dois domínios inibitórios distintos para enzimas semelhantes à tripsina e quimotripsina. O interesse por essa classe de inibidores decorre de estudos que demonstraram o efeito protetor dos BBI no câncer induzido quimicamente. No presente trabalho avaliou-se o efeito dos BBI isolados de Macrotyloma axillare e Glycine max na prevenção de neoplasias colo-retal induzidas por injeções intraperitoneais de dimetilhidrazina (DMH) durante 12 semanas. Os grupos de camundongos controle e testes (tratados com DMH) receberam uma dieta contendo BBI, na dose de 0,1% (p/p) associada (DMHV) ou não às vitaminas A, C e E, durante 24 semanas. Camundongos tratados com DMH apresentaram alterações histopatológicas compatíveis com a formação de pólipos neoplásicos. Em concordância com a histologia, a análise do marcador tumoral CD44, por Western blotting, revelou aumento significativo de expressão nos animais tratados com DMH e DMHV. Os extratos protéicos provenientes desses tecidos apresentaram aumento significativo de atividade proteolítica dependente de proteassoma, em ensaios peptidásicos para as atividades tripsina e quimotripsina símiles. Por outro lado, para o grupo de animais tratados com DMH e BBI observou-se atividade proteassomal comparável àquela dos animais do grupo controle. O tratamento de animais com BBI isoladamente promoveu a redução da atividade proteolítica dependente de proteassoma quando comparada àquela de animais alimentados com dieta normal. Além disso, retenção de enzimas com atividades proteolíticas tripsina e quimotripsina-símile, provenientes das frações lisossomal e solúvel, foi observada utilizando uma coluna de afinidade sepharose-BBI. As atividades dessas enzimas também se mostraram significativamente aumentadas no grupo de animais tratados com DMH. Esses resultados demonstraram que inibições de atividades proteolíticas distintas podem contribuir para o mecanismo protetor dos BBI. Coletivamente os resultados permitiram concluir que o tratamento com BBI foi capaz de prevenir a formação de pólipos intestinais, impedir o estabelecimento de eventos inflamatórios no intestino delgado, cólon e glândula anal, e manter em níveis normais o marcador clássico tumoral CD44.
metadata.dc.description.abstracten: The Bowman-Birk inhibitors (BBI) are protein molecules containing two distinct inhibitory domains for trypsin and chymotrypsin-like enzymes. The interest for this class of inhibitors is based on studies which demonstrated a protective effect promoted by BBI, particularly for chemically-induced cancers. In the present work, we evaluated the effects of BBI isolated from Macrotyloma axillare and Glycine max in the prevention of colon cancers induced by intraperitoneal injections of dimethylhydrazine (DMH) during 12 weeks. Control and DMH-treated animals were fed a diet containing BBI at a dose of 0.1% (p/p) associated (DMHV) or not with the vitamins A, C and E, during 24 weeks. DMH-treated animals exhibited hystopathological alterations compatible with the formation of neoplastic polyps. In agreement with the hystological examinations, analysis of the tumor marker CD44, by Western blotting, revealed a significant increase in its expression for the DMH-treated group. Protein extracts from these tissues also contained increased proteasome-dependent proteolytic activity as judged by peptidase assays for the trypsin and chymotrypsin-like activities. In contrast, for DMH + BBI-treated animals proteasomal activity was comparable to that observed for the control group. In fact, animals given BBI alone, as a diet supplement, exhibited decreased proteasomal activity when compared to that from animals fed a normal diet. In addition, by using a sepharose-BBI affinity column, it was observed retention of enzymes displaying trypsin and chymotrypsin-like activities obtained from the lysosomal and soluble fractions. These proteolytic activities were also shown to be increased for DMH-treated animals. These results suggest that the inhibition of distinct proteolytic activities could account for the protective mechanisms produced by BBI. Collectively our analyses allowed us to conclude that BBI treatment was able to prevent intestine polyp formation, decrease any associated inflammatory processes and keep at basal levels the classic tumor marker CD44.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/2510
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