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Title: Expressão de pRB, ki-67 e da oncoproteína E7 do papilomavírus humano nas lesões intraepiteliais cervicais e no carcinoma epidermoide invasor.
Authors: Assis, Bárbara Letícia Gonçalves de
metadata.dc.contributor.advisor: Lima, Angélica Alves
Keywords: Colo uterino
Câncer
Papilomavírus
Biomarcadores
Issue Date: 2019
metadata.dc.contributor.referee: Sabino, Adriano de Paula
Vieira, Paula Melo de Abreu
Lima, Angélica Alves
Citation: ASSIS, Bárbara Letícia Gonçalves de. Expressão de pRB, ki-67 e da oncoproteína E7 do papilomavírus humano nas lesões intraepiteliais cervicais e no carcinoma epidermoide invasor. 2019. 73 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) – Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2018.
Abstract: O câncer cervical é uma das doenças mais frequentes que acometem a população feminina. O Papilomavírus Humano de alto risco oncogênico (HR-HPV), principal fator de risco do câncer cervical, interfere no ciclo celular do hospedeiro levando à desregulacão e progressão para lesões neoplásicas. Esta interferência pode levar a indicação de marcadores úteis no prognóstico e no diagnóstico da doença. A maioria dos marcadores que vêm sendo investigados são proteínas virais, de ciclo celular e de proliferação. Assim, neste estudo foi avaliada a expressão imunoistoquímica das proteínas pRb, Ki-67 e E7-HPV nas lesões intraepiteliais cervicais e no carcinoma epidermoide invasor, correlacionando-as com a infecção por HR-HPV e a expressão imunoistoquímica de p16, p53, PCNA e L1/HPV. O trabalho foi realizado com 150 amostras de biópsias cervicais, distribuídas em Cervicite (C), Neoplasia Intraepitelial Cervical (NIC) de graus 1, 2 e 3 e Carcinoma Epidermoide Invasor (CEI). A expressão das proteínas foi avaliada pela técnica de imunoistoquímica utilizando anticorpos monoclonais anti-pRb, anti-ki-67 e anti-E7-HPV16. A pesquisa de HR-HPV foi feita por PCR tempo real que possibilitou a detecção de 14 tipos virais de alto risco oncogênico (HR-HPV). Análise inicial mostrou que as proteínas de ciclo celular, de proliferação e do HPV apresentaram associação com o grau da lesão (p<0,05), sendo pRb, p53 e L1/HPV menos expressas nas lesões mais graves (NIC3/CEI) enquanto ki-6716, PCNA e p16 foram mais expressas nessas lesões. Em relação à infecção viral, HR-HPV foi detectado em 61,3% das amostras, com predomínio de HPV 16 em NIC3/CEI e de outros tipos virais de alto risco em NIC1/NIC2. HPV 18 foi detectado apenas em amostras NIC3/CEI. A presença de HR-HPV foi associada ao diagnóstico histopatológico. Foi observada alta positividade de HPV em todas as amostras e maior frequência de HR-HPV nas lesões mais graves. Os resultados mostraram menor expressão de E7/HPV em NIC2 e CEI. Nas lesões cervicais, independente do grau, houve predomínio de E7+/HRHPV+ (NIC1 = 50,0%; NIC2 = 36,7% e NIC3 = 60,0%), exceto em CEI onde o padrão E7-/HRHPV+ foi o mais presente (43,3%). Em cervicite os padrões mais encontrados foram E7-/HRHPV- (30,8%) e E7+/HRHPV- (57,7%). Na análise de associação das proteínas de ciclo celular com o diagnóstico histopatológico foi observada significativa diminuição da expressão de pRb e aumento de p16 nas lesões mais graves nas amostras positivas para HR-HPV e E7/HPV. A avaliação do desempenho diagnóstico apontou que a associação do teste de pRb com p16 (A: NIC1+ = 87,0%) ou com HR-HPV (A: NIC1+ = 80,8%) tiveram as melhores acurácias para diferenciar lesões NIC1+. A associação do teste de pRb com o de L1/HPV (A: NIC2+ = 80,1%) apresentou desempenho satisfatório na avaliação de NIC2+. Os resultados sugerem que a análise de pRb, p16 e HR-HPV, isolados ou associados, podem ser úteis como possíveis marcadores auxiliando na diferenciação dos graus das lesões intraepiteliais cervicais.
metadata.dc.description.abstracten: Cervical cancer is one of the most commom diseases which affecting female population. Persistent infection of high-risk HPVs (HR-HPV), main risk factor to development of cervical cancer, interferes in host cell cycle leading to deregulation and progression to neoplastic lesions. These alterations can lead to indication of useful markers in prognosis and diagnosis of disease. Most of markers have been investigated are viral oncoprotein, cell cycle and proliferation proteins. Thus, in this study the immunohistochemical expression of pRb, Ki-67 and E7-HPV proteins in cervical intraepithelial lesions and carcinoma was correlated with HR-HPV infection and immunohistochemical expression of p16, p53, PCNA and L1 / HPV. This research was carried out with 150 cervical biopsy specimens, distributed in Cervicitis (C), Cervical Intraepithelial Neoplasia (CIN) of grades 1, 2 and 3 and Invasive Cervical Carcinoma (ICC). Protein expression was assessed by immunohistochemistry using anti-pRb, anti-ki-67 and anti-E7-HPV16 monoclonal antibodies. HR-HPV DNA was performed by real-time PCR that enabled detection of 14 high-risk oncogenic viral types (HR-HPV). Initial analysis showed that cell cycle, proliferation and HPV proteins were associated with lesion grade (p <0.05), with pRb, p53 and L1/HPV less expressed in most severe lesions (CIN3/ICC) while ki-67, p16 and PCNA were more expressed in these lesions. Regarding viral infection, HR-HPV was detected in 61.3% of samples, with a predominance of HPV 16 in CIN3/ICC and other high-risk viral types in CIN1/CIN2. HPV 18 was detected only in CIN3/ICC samples. Presence of HR-HPV was associated with histopathological diagnosis. High HPV positivity was observed in all samples and a higher HR-HPV frequency in more severe lesions. Results showed lower expression of E7/HPV in CIN2 and ICC. In cervical lesions, regardless of degree, there was a predominance of E7+/HRHPV+ (CIN1 = 50.0%, CIN2 = 36.7%, CIN3 = 60.0%), except in ICC where E7+/HRHPV- pattern was more present (43.3%). In cervicitis, the most frequent patterns were E7-/HRHPV- (30.8%) and E7+/HRHPV- (57.7%). In analysis of association of cell cycle proteins with histopathological diagnosis was observed a significant decrease in pRb expression and increase of p16 in most severe lesions in HR-HPV and E7/HPV positive samples. Diagnosis performance assessment showed that association of pRb test with p16 (A: CIN1+ = 87.0%) or with HR-HPV (A: CIN1 + = 80.8%) had the best accuracy to differentiate CIN1+ lesions. Association of pRb test with L1/HPV test (A: CIN2 + = 80.1%) presented satisfactory performance to evaluate CIN2+ lesions. These results suggest that analysis of pRb, p16, and HR-HPV, isolated or associated, may be useful as possible markers support in differentiation of degrees of cervical intraepithelial lesions.
Description: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto.
URI: http://www.repositorio.ufop.br/handle/123456789/11036
metadata.dc.rights.license: Autorização concedida ao Repositório Institucional da UFOP pelo(a) autor(a) em 10/04/2019 com as seguintes condições: disponível sob Licença Creative Commons 4.0 que permite copiar, distribuir e transmitir o trabalho desde que sejam citados o autor e o licenciante. Não permite a adaptação.
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