O papel dos receptores de adenosina na resposta de células NK durante a infecção por Leishmania amazonensis.

Abstract

As células Natural Killer (NK) são importantes células efetoras na imunidade inata e participam ativamente da resposta imune do hospedeiro contra infecções, inclusive durante a infecção por Leishmania amazonensis. Células NK secretam IFN-γ após a estimulação por IL-12 produzida por macrófagos e células dendríticas (DC). Esta citocina é crucial para a eliminação de L. amazonensis por meio da ativação de fagócitos e para o desenvolvimento de respostas adaptativas subsequentes, especialmente do tipo Th1. O ATP liberado por células sob estresse, é capaz de auxiliar no estabelecimento de resposta inflamatória, enquanto a adenosina, produto da hidrólise de ATP por ecto-nucleotidases, leva as células a um estado anti-inflamatório. L. amazonensis expressa enzimas capazes de degradar ATP extracelular a adenosina, induzindo assim a resposta anti-inflamatória de várias células, incluindo macrófagos, DC e possivelmente células NK. O objetivo deste estudo foi avaliar o papel dos receptores de adenosina em células NK durante a infecção por L. amazonensis. Para isso, avaliamos a presença dos receptores A2a e A2b de adenosina na superfície da célula NK por microscopia de fluorescência, e observamos que estes receptores estão presentes na superfície da célula NK, e que há o aumento da expressão do receptor A2a na superfície celular quando a célula NK é cultivada na presença de L. amazonensis. Além disso, DC derivadas de medula óssea de camundongos C57BL/6 infectadas por L. amazonensis foram co-cultivadas com células NK recém-isoladas de baço, na presença de antagonistas dos receptores A2a e A2b, e a produção de IFN-γ foi medida por ELISA. Observamos que a inibição do receptor A2a leva ao aumento da produção de IFN-γ e a inibição de ambos os receptores leva à diminuição da taxa de infecção de DC presentes na co-cultura. Analisamos, por citometria de fluxo, a produção de IFN-γ e IL-10 por células NK, linfócitos T CD4 e linfócitos T CD8, em camundongos C57BL/6 infectados por L. amazonensis e tratados com antagonistas dos receptores A2a e A2b e dosamos por ELISA a produção de IFN-γ por células de linfonodos estimuladas com antígeno particulado de Leishmania amazonensis. Mostramos que a inibição do receptor A2a aumenta a porcentagem de células NK e linfócitos T CD4 produtoras de IFN-γ sem haver aumento da produção de IL-10, além de levar ao aumento da produção de IFN-γ por células de linfonodos estimuladas in vitro. Com estes resultados, podemos concluir que o receptor de adenosina A2a, presente na célula NK, tem um papel de grande importância na infecção por L. amazonensis e seu bloqueio leva ao aumento da produção de citocinas pró-inflamatórias durante a infecção, tanto em modelo in vitro, quanto in vivo.