DSpace Coleção:http://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/88212024-03-29T06:07:40Z2024-03-29T06:07:40ZAvaliação comparativa do processo auto-fermentativo e bioaumentado de diferentes amostras de bagaços de cana- de-açúcar : identificação da microbiota autóctone e produtos gerados.Souza, Isabela Morato dehttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/180282024-01-24T19:09:06Z2023-01-01T00:00:00ZTítulo: Avaliação comparativa do processo auto-fermentativo e bioaumentado de diferentes amostras de bagaços de cana- de-açúcar : identificação da microbiota autóctone e produtos gerados.
Autor(es): Souza, Isabela Morato de
Resumo: O bagaço de cana-de-açúcar (BCA) é um material remanescente da indústria
sucroalcooleira considerado fonte renovável, de baixo custo e rico em açúcares. A
conversão desta biomassa lignocelulósica em bioprodutos é uma alternativa favorável
para amenizar problemas ambientais causados pelo uso excessivo de matéria-prima de
origem fóssil, além de contribuir para o conceito de biorrefinaria. Entretanto, devido à
sua estrutura recalcitrante, o acesso aos açúcares do biomaterial é um desafio para
microrganismos fermentadores. Assim sendo, objetivando alcançar um bioprocesso
consolidado, o presente estudo investigou o potencial hidrolítico e fermentativo da
microbiota autóctone do BCA bruto durante sua fermentação, bem como a prospecção
dos microrganismos presentes na biomassa. Nos ensaios de fermentação foram testadas
amostras de BCA de seis usinas (A, B, C, D, E e F) na concentração de 10 g/L,
monitoradas por 408 h a 37oC, sob agitação. As cepas cultiváveis foram coletadas no
tempo 96 h e três delas (X, Y e Z) foram selecionadas para serem inoculadas
individualmente em ensaios bioaumentados. A caracterização metagenômica do
consórcio microbiano foi realizada e para quantificação dos metabólitos obtidos durante
a fermentação foi feita a análise da fração líquida, enquanto a fração sólida foi
caracterizada a fim de determinar os teores de celulose, hemiceluloses e lignina no início
e ao final do ensaio. A microbiota presente nos bagaços no início da fermentação incluiu
principalmente organismos do gênero Acetobacter, ao passo que, com 96 h de ensaio
houve predominância de bactérias fermentadoras, como Clostridium, Enterobacter e
Ruminiclostridium. Ao final do ensaio a abundância de Ruminiclostridium foi expressiva
para as amostras analisadas neste momento. Dentre as condições testadas, alcançou-se a
remoção de 37% da fração de lignina, 58% de celulose e 44% de hemiceluloses na
fermentação do bagaço D por sua microbiota autóctone bioaumentada por Klebsiella
pneumoniae (isolado X). Os principais produtos obtidos foram ácido caproico (2,81 g/L
em Dy), etanol (2,68 g/L em A), ácido acético (1,15 g/L em D), ácido isobutírico (0,97
g/L em E), metanol (0,97 g/L em A) e ácido propiônico (0,34 g/L em C). Isto demonstra
o elevado potencial lignocelulolítico da microbiota autóctone do BCA por acessar e
fermentar o próprio substrato, demonstrando a possibilidade de obtenção de bioprodutos
de valor agregado através do bioprocesso consolidado.
Descrição: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.2023-01-01T00:00:00ZAnálise de QTL e gênomica comparativa para estudar mecanismos regulatórios da H+ -ATPASE de membrana plasmática de Saccharomyces cerevisiae.Barbosa, Patrícia Gonçalves Prateshttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/178522023-11-23T19:43:44Z2021-01-01T00:00:00ZTítulo: Análise de QTL e gênomica comparativa para estudar mecanismos regulatórios da H+ -ATPASE de membrana plasmática de Saccharomyces cerevisiae.
Autor(es): Barbosa, Patrícia Gonçalves Prates
Resumo: A H+
-ATPase é uma proteína presente na membrana citoplasmática de plantas e fungos e
desempenha um papel essencial na geração de um gradiente eletroquímico de prótons,
importante para a captação de nutrientes e regulação do pH intracelular. A ativação da
H
+
-ATPase da membrana citoplasmática em Saccharomyces cerevisiae induzida por
glicose é supostamente atribuída a um sinal de cálcio intracelular correlacionado ao
metabolismo do fosfatidilinositol. Em estudos anteriores do nosso grupo de pesquisa, foi
observada diferença de fenótipo entre as cepas S. cerevisiae BY4742 arg82Δ e PJ69
arg82Δ através do teste de atividade da H
+
-ATPase, indicando que o fenótipo de maior
ativação da H
+
-ATPase está relacionado a vários genes. Diante do exposto, o objetivo
deste trabalho foi utilizar diferentes abordagens genômicas para identificar novos
componentes da regulação induzida por glicose da H
+
-ATPase. Para isso, foram
realizados o sequenciamento do genoma segregante agrupado, mapeamento de QTLs e
análises de Bioinformática para identificar o possível motivo da diferença de fenótipo e,
ou, novos componentes desta via de transdução de sinal. Uma vez identificadas as
variantes na análise de mapeamento de QTL foi desenvolvido o script
SNPsInQTLselection.py para identificar as bases genéticas que podem estar envolvidas
com o fenótipo de maior atividade da H+
-ATPase. Após a utilização desse script foram
identificadas 42 variantes em 33 genes potencialmente envolvidos com o fenótipo de
interesse. Para priorização desses genes candidatos foi realizado análise de
enriquecimento e interatoma que permitiram identificar 10 genes enriquecidos e
envolvidos na via da telomerase e do fosfatidilinositol (STT4, PIK2, UGA2, EST1, MEC3,
HEK2, TOP3, PSO2, STO1, FUR4). Cepas do background BY contendo essesrespectivos
genes deletados (coleção EUROSCARF) foram utilizadas para teste de fenótipo de
acidificação extracelular e sinalização de cálcio induzida por glicose. Por meio desses
testes, 4 (UGA2, FUR4, EST1 e STT4) dos 10 genes enriquecidos, apresentaram o
fenótipo de maior ativação da H+
-ATPase, fenótipo esse evidenciado nos testes de
acidificação extracelular e sinal de cálcio. Destes 4 genes, vale destacar o STT4 visto que,
de acordo com a função descrita para esse gene na literatura o fosfatidilinositol-4-fosfato
pode exercer um papel na regulação da via de ativação de H
+
-ATPase, controlando a
atividade da fosfolipase C. Tendo em vista uma relação positiva entre atividade da H
+
-
ATPase e desempenho fermentativo, estudos futuros podem ser feitos com os
genes/alelos identificados neste trabalho, com aplicação em cepas de leveduras industriais visando a melhoria na eficiência de processos fermentativos. Os genes (UGA2, FUR4,
EST1 e STT4) merecem investigação detalhada para verificação do possível envolvimento
na via de sinalização da H+
-ATPase. Esse trabalho apresenta pela primeira vez uma
estratégia de Bioinformática para identificar genes candidatos quando o resultado do
mapeamento de QTL não for significativo.
Descrição: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.2021-01-01T00:00:00ZAvaliação in silico e in vitro do efeito tripanocida de óleos essenciais e desenvolvimento de sistemas nanoestruturados como alternativa terapêutica da doença de Chagas.Seibert, Janaína Brandãohttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/173762023-08-29T20:00:43Z2019-01-01T00:00:00ZTítulo: Avaliação in silico e in vitro do efeito tripanocida de óleos essenciais e desenvolvimento de sistemas nanoestruturados como alternativa terapêutica da doença de Chagas.
Autor(es): Seibert, Janaína Brandão
Resumo: A falta de uma terapêutica tripanocida eficiente, principalmente na fase crônica da
doença de Chagas e sem a presença de efeitos adversos intensos impulsiona a pesquisa
para o desenvolvimento de novos fármacos. As substâncias produzidas através do
metabolismo secundário de plantas podem apresentar diferentes efeitos biológicos e
serem utilizadas como princípios ativos no tratamento de doenças. Dessa forma, o
objetivo desse trabalho foi caracterizar quimicamente os óleos essenciais extraídos das
espécies Cymbopogon densiflorus, Cymbopogon nardus, Melaleuca leucadendron e
Microlicia graveolens, bem como avaliar a atividade anti-Trypanosoma cruzi dos
fármacos livres e após encapsulamento em sistemas nanoestruturados. A obtenção
desses óleos ocorreu a partir da hidrodestilação das partes aéreas, com rendimentos em
torno de 0,1 a 2,0% de acordo com a espécie. A caracterização realizada através da
cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas permitiu a identificação de
mais de 90% dos compostos, com presença majoritária de monoterpenos oxigenados. A
partir da análise in silico foi possível prever inicialmente que todos os óleos em estudo
apresentariam potencial contra o parasito T. cruzi. No entanto, na avaliação in vitro
desta atividade utilizando a cepa Tulahuen, somente o óleo de folhas de C. densiflorus
se revelou ativo, a partir de uma CI50 sobre o parasito equivalente a 60 μg/mL (IS= 3,8).
No ensaio de permeabilidade de membrana do parasito, concentrações superiores a 30
μg/mL de óleo apresentaram diferenças em relação ao controle. Este resultado foi
confirmado através da microscopia eletrônica de transmissão. Além disso, sistemas
nanoemulsionados, lipossomais e micelares carregados de óleo essencial e/ou
benznidazol foram desenvolvidos e apresentaram tamanho em escala nanométrica (<500
nm). A adição dos princípios ativos favoreceu a homogeneidade de distribuição de
tamanho para todas as formulações. Além disso, potencial zeta negativo e um pH ácido
também definiram as formulações. A estabilidade dos sistemas foi avaliada e apenas os
lipossomas contendo ambos os fármacos foram instáveis. As formulações foram
capazes de reproduzir a atividade tripanocida apresentada pelo óleo e benznidazol a
partir de concentrações inferiores quando comparadas aos fármacos livres. No entanto,
as micelas foram caracterizadas pelos maiores índices de seletividade e um efeito
sinérgico foi comprovado quando ambos os fármacos foram encapsulados
concomitantemente nessa forma farmacêutica. Sendo assim, os resultados desse
trabalho demonstram o óleo essencial de folhas de C. densiflorus como candidato
potencial ao tratamento da doença de Chagas, o qual é capaz de eliminar o T. cruzi in
vitro a partir de baixas concentrações. Em adição, as formas micelares contendo
benznidazol podem ser uma alternativa na quimioterapêutica chagásica tanto na sua
forma simples, bem como, em combinação com o óleo essencial de C. densiflorus.
Descrição: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.2019-01-01T00:00:00ZInfluência da doença de Chagas na farmacocinética do Benznidazol no modelo cão.Bandeira, Lorena Cerahttp://www.repositorio.ufop.br/jspui/handle/123456789/161252023-02-07T16:59:04Z2022-01-01T00:00:00ZTítulo: Influência da doença de Chagas na farmacocinética do Benznidazol no modelo cão.
Autor(es): Bandeira, Lorena Cera
Resumo: A alta variabilidade na eficácia e na segurança da quimioterapia anti-chagásica envolvendo o benznidazol (BNZ) pode ser devido às alterações farmacocinéticas. Tais alterações podem ser ocasionadas pela inibição de enzimas de metabolismo e transportadores de membranas devido ao aumento de mediadores do processo inflamatório na doença de Chagas. O presente estudo avaliou o impacto das infecções experimentais aguda e crônica pela cepa Be-78 do T. cruzi na farmacocinética do BNZ no modelo cão. Foram investigados 19 cães (n= 10 cães com infecção aguda; n= 9 cães com
infecção crônica), SRD, com idade entre 04-10 meses e peso entre 20-35 kg. Os cães de ambas as fases da infecção foram divididos em dois grupos, sendo o Grupo I (infectado não tratado) e Grupo II (infectado e tratado). O estudo foi divido em 4 ocasiões. Na Ocasião 1 (antes da infecção) foi realizada coleta de sangue para análise de perfil das citocinas IL-6, IFN-γ, IL-10 e TNF-α por meio de ensaio de ELISA. Na Ocasião 2 (após a infecção, antes do início do tratamento) foi coletado sangue para análise de citocinas e carga parasitária por meio de qPCR. Na Ocasião 3 (após 10, 30, 40 e 60 dias de dose
múltipla oral 3,5mg/Kg/12h de BNZ) foi realizada coleta seriada de sangue no intervalo de dose de 12h para análise farmacocinética para o Grupo II; e coleta de sangue para análise de citocinas e carga parasitária para os Grupos I e II. Na Ocasião 4 (após 30 dias do término do tratamento) foi coletado sangue para análise de citocinas e carga parasitária. O BNZ nas amostras de soro foi quantificado por CLAE-DAD. O método bioanalítico validado seguindo o guia da ANVISA, apresentou ausência de efeitos matriz e residual; limites de quantificação, estabilidade, precisão e exatidão compatíveis para a análise do BNZ em soro. Os parâmetros farmacocinéticos do BNZ, obtidos a partir de um modelo
não compartimental, foram similares entre os momentos de coleta seriada na Ocasião 3 na fase aguda e também na fase crônica da infecção. O perfil farmacocinético do BNZ obtido em cães na fase aguda da doença é semelhante ao observado em cães sadios (dados históricos do nosso grupo de pesquisa). Por outro lado, foi observado que a infecção crônica aumenta os valores de Cmax (9,70 vs 17,97), Css (7,70 vs 12,56) e AUC0-12 (90,39 vs 150,76), e ainda reduz Vdss (17,34 vs 9,20) e CLss (0,84 vs 0,56) quando comparados com o grupo de cães sadios. Em relação a fase aguda, a fase crônica também eleva os valores de Cmax (10,55 vs 17,97), Css (7,08 vs 12,56), Cmin (4,32 vs 8,25) e AUC0-12 (84,98 vs 150,76) e reduz Vdss (13,92 vs 9,20) e CLss (0,99 vs 0,56). Os mediadores inflamatórios IFN-γ, IL-10, TNF-α e IL-6 estão aumentados nas fases aguda e crônica da doença, sendo a IL-6 a citocina produzida em maior quantidade e a única com aumento significativo (em até 7 vezes) de suas concentrações séricas nos cães da fase crônica em relação à fase aguda, mesmo quando o tratamento com o BNZ é administrado. Nos grupos I e II da fase aguda é observada uma elevada carga parasitária na Ocasião 2 que é reduzida significativamente nas Ocasiões 3 e 4. Nos grupos I e II da fase crônica observa-se uma baixa carga parasitária nas Ocasiões 2 e 3, e um aumento significativo da carga parasitária na Ocasião 4. Portanto, a infecção crônica experimental pela cepa Berenice-78 do T. cruzi
altera significativamente a farmacocinética do BNZ em cães, provavelmente pela inibição do transporte de membrana glicoproteína-P (P-gp) causada pelo aumento da citocina pró-inflamatória IL-6.
Descrição: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.2022-01-01T00:00:00Z