Navegando por Autor "Silva, Eduardo de Almeida Marques da"
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Item Antigenic extracts of Leishmania braziliensis and Leishmania amazonensis associated with saponin partially protects BALB/c mice against Leishmania chagasi infection by suppressing IL-10 and IL-4 production.(2010) Grenfell, Rafaella Fortini Queiroz; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Testasicca, Miriam Conceição de Souza; Coelho, Eduardo Antônio Ferraz; Fernandes, Ana Paula Salles Moura; Afonso, Luís Carlos Crocco; Rezende, Simone AparecidaThis study evaluated two vaccine candidates for their effectiveness in protecting BALB/c mice against Leishma¬nia chagasi infection. These immunogenic preparations were composed of Leishmania amazonensis or Leishmania braziliensis antigenic extracts in association with saponin adjuvant. Mice were given three subcutaneous doses of one of these vaccine candidates weekly for three weeks and four weeks later challenged with promastigotes of L. chagasi by intravenous injection. We observed that both vaccine candidates induced a significant reduction in the parasite load of the liver, while the L. amazonensis antigenic extract also stimulated a reduction in spleen parasite load. This protection was associated with a suppression of both interleukin (IL)-10 and IL-4 cytokines by spleen cells in response to L. chagasi antigen. No change was detected in the production of IFN-γ. Our data show that these im-munogenic preparations reduce the type 2 immune response leading to the control of parasite replication.Item Atividade reguladora da via de degradação extracelular de nucleotídeos de adenina na virulência de diferentes cepas e formas evolutivas de Trypanosoma cruzi in vitro e in vivo.(2020) Leite, Ana Luísa Junqueira; Silva, André Talvani Pedrosa da; Silva, André Talvani Pedrosa da; Roatt, Bruno Mendes; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Bressan, Gustavo Costa; Borges, William de CastroPopulações distintas de Trypanosoma cruzi interagem com células musculares cardíacas de mamíferos, causando diferentes padrões de inflamação e baixa funcionalidade do coração. Durante a infecção pelo T. cruzi, o ATP extracelular é hidrolisado em seu componente monofosfatado (AMP), com base na infectividade, virulência e regulação da resposta inflamatória. T. cruzi realiza essa hidrólise através da ectonucleotidase, TcNTPDase-1. Este estudo teve como objetivo avaliar o papel da via de degradação extracelular de nucleotídeos de adenina em culturas ricas em formas tripomastigotas metacíclicas (CTM) e formas tripomastigotas derivadas de cultura celular (TC) das cepas Colombiana (unidade de tipagem discreta - DTU I), VL-10 (DTU II) e CL (DTU VI) de T. cruzi. Para isso, medimos a atividade da ectonucleotidase no parasito e realizamos a infecção em células J774 infectadas e em camundongos C57BL/6 infectados com parasitos pré-tratados ou não com suramina para avaliar o perfil cardíaco parasitário e inflamatório na fase aguda da infecção. Nossos dados indicaram uma atividade mais alta para hidrólise de ATP no CTM da cepa Colombiana em comparação com as das cepas VL-10 e CL. A TC da cepa CL apresentou maior capacidade de hidrolisar o ATP do que as cepas Colombiana e VL-10. A suramina inibiu a hidrólise de ATP em todas as formas e cepas do parasito estudadas. A infecção em células J774 com parasitos pré-tratados com suramina foi reduzida e aumentou a produção de nitrito in vitro. Estudos in vivo mostraram uma redução do infiltrado inflamatório no tecido cardíaco de animais infectados com TC da cepa Colombiana prétratado com suramina. Em conclusão, a atividade dessa ectonucleotidase nas formas tripomastigotas direciona parte das características biológicas observadas em DTUs distintas e pode induzir patogênese cardíaca durante a infecção por T. cruzi.Item Development of chronic cardiomyopathy in canine Chagas disease correlates with high IFN-g, TNF-a, and low IL-10 production during the acute infection phase.(2009) Guedes, Paulo Marcos da Matta; Veloso, Vanja Maria; Afonso, Luís Carlos Crocco; Caliari, Marcelo Vidigal; Carneiro, Cláudia Martins; Diniz, Lívia de Figueiredo; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Caldas, Ivo Santana; Matta, Maria Adelaide do Valle; Souza, Sheler Martins de; Lana, Marta de; Chiari, Egler; Galvão, Lúcia Maria da Cunha; Bahia, Maria TerezinhaWhen infected with Trypanosoma cruzi, Beagle dogs develop symptoms similar to those of Chagas disease in human beings, and could be an important experimental model for a better understanding of the immunopathogenic mechanisms involved in chronic chagasic infection. This study evaluates IL-10, IFN-g and TNF-a production in the sera, culture supernatant, heart and cervical lymph nodes and their correlation with cardiomegaly, cardiac inflammation and fibrosis in Beagle dogs infected with T. cruzi. Pathological analysis showed severe splenomegaly, lymphadenopathy and myocarditis in all infected dogs during the acute phase of the disease, with cardiomegaly, inflammation and fibrosis observed in 83% of the animals infected by T. cruzi during the chronic phase. The data indicate that infected animals producing IL-10 in the heart during the chronic phase and showing high IL-10 production in the culture supernatant and serum during the acute phase had lower cardiac alterations (myocarditis, fibrosis and cardiomegaly) than those with high IFN-g and TNF-a levels. These animals produced low IL-10 levels in the culture supernatant and serum during the acute phase and did not produce IL-10 in the heart during the chronic phase of the disease. Our findings showed that Beagle dogs are a good model for studying the immunopathogenic mechanism of Chagas disease, since they reproduce the clinical and immunological findings described in chagasic patients. The data suggest that the development of the chronic cardiac form of the disease is related to a strong Th1 response during the acute phase of the disease, while the development of the indeterminate form results from a blend of Th1 and Th2 responses soon after infection, suggesting that the acute phase immune response is important for the genesis of chronic cardiac lesions.Item Evaluation of immune responses and protection induced by A2 and nucleoside hydrolase (NH) DNA vaccines against Leishmania chagasi and Leishmania amazonensis experimental infections.(2007) Zanin, Francisca Helena Calheiros; Coelho, Eduardo Antônio Ferraz; Tavares, Carlos Alberto Pereira; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Costa, Miriam Maria Silva; Rezende, Simone Aparecida; Gazzinelli, Ricardo Tostes; Fernandes, Ana Paula Salles MouraSeveral antigens have been tested as vaccine candidates against Leishmania infections but controversial results have been reported when different antigens are co-administered in combined vaccination protocols. Immunization with A2 or nucleoside hydrolase (NH) antigens was previously shown to induce Th1 immune responses and protection in BALB/c mice against Leishmania donovani and L. amazonensis (A2) or L. donovani and L. mexicana (NH) infections. In this work, we investigated the protective efficacy of A2 and NH DNA vaccines, in BALB/c mice, against L. amazonensis or L. chagasi challenge infection. Immunization with either A2 (A2-pCDNA3) or NH (NH-VR1012) DNA induced an elevated IFN-g production before infection; however, only A2 DNA immunized mice were protected against both Leishmania species and displayed a sustained IFN-g production and very low IL-4 and IL-10 levels, after challenge. Mice immunized with NH/A2 DNA produced higher levels of IFN-g in response to both specific recombinant proteins (rNH or rA2), but displayed higher IL-4 and IL-10 levels and increased edema and parasite loads after L. amazonensis infection, as compared to A2 DNA immunized animals. These data extend the characterization of the immune responses induced by NH and A2 antigens as potential candidates to compose a defined vaccine and indicate that a highly polarized type 1 immune response is required for improvement of protective levels of combined vaccines against both L. amazonensis and L. chagasi infections.Item Extracellular nucleotide metabolism in Leishmania : influence of adenosine in the establishment of infection.(2008) Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Oliveira, Jamile Camargos de; Figueiredo, Amanda Braga de; Lima Júnior, Djalma de Souza; Carneiro, Cláudia Martins; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Afonso, Luís Carlos CroccoLeishmaniasis is a parasitic disease with a variety of clinical forms, which are related to the Leishmania species involved. In the murine model, Leishmania amazonensis causes chronic non-healing lesions in Leishmania braziliensis- or Leishmania major-resistant mouse strains. In this study, we investigated the involvement of the pathway of extracellular nucleotide hydrolysis, with special focus on the role of extracellular adenosine, in the establishment of Leishmania infection. Our results show that the more virulent parasitedL. Amazonensisdhydrolyzes higher amounts of ATP, ADP and AMP than the two other species, probably due to the higher expression of membrane NTPDase. Corroborating the idea that increased production of adenosine is important to lesion development and establishment of tissue parasitism, we observed that increased 50-nucleotidase activity in L. braziliensis or addition of adenosine at the moment of infection with this parasite resulted in an increase in lesion size and parasitism as well as a delay in lesion healing. Furthermore, inhibition of adenosine receptor A2B led to decreased lesion size and parasitism. Thus, our results suggest that the conversion of ATP, a molecule with pro-inflammatory activity, into adenosine, which possesses immunomodulatory properties, may contribute to the establishment of infection by Leishmania.Item Influência do metabolismo extracelular de ATP em infecções por parasitos do gênero leishmania.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2008) Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Afonso, Luís Carlos CroccoVariações nos quadros clínicos da leishmaniose, observadas tanto na doença em humanos quanto em murinos, sugerem a existência de uma diferenciação, dependente da espécie, na capacidade de parasitos do gênero Leishmania causarem lesões no hospedeiro. A procura de fatores que diferenciam as espécies de Leishmania quanto à sua virulência se faz, então, necessária para o entendimento dos mecanismos pelos quais esses parasitos causam danos aos seus hospedeiros, possibilitando a descoberta de novas ferramentas de potencial terapêutico contra a leishmaniose. Componentes da via de metabolismo do ATP extracelular são candidatos potenciais para fatores de virulência desses parasitos, visto que tanto o ATP quanto a adenosina, produto da hidrólise de AMP, são capazes de influenciar a resposta imunológica do hospedeiro e, conseqüentemente, o estabelecimento do parasito. Essa hipótese é suportada pelo fato da Leishmania necessitar da utilização da via de salvação de purinas pela ação de enzimas, dentre elas as apirases, sobre o ATP extracelular, que possui propriedades imunoestimulantes, para gerar adenosina, produto da hidrólise do AMP pelas 5’-nucleotidases, cuja importância para o metabolismo do parasito e para a regulação da resposta imune está bem descrita na literatura. Para testar essa hipótese, nós estudamos três espécies de Leishmania com diferentes graus de virulência em camundongos C57BL/6: a mais virulenta L. amazonensis e as espécies L. braziliensis e L. major. Inicialmente, formas promastigotas metacíclicas e procíclicas desses parasitos foram testadas para sua capacidade de hidrolisar ATP, ADP ou AMP. As formas metacíclicas (infectantes) de L. amazonensis mostraram maior capacidade de hidrólise para os três nucleotídeos analisados, quando comparadas com as outras duas espécies menos virulentas. Além disso, sua capacidade de hidrólise de ATP foi maior que a das formas procíclicas da mesma espécie, sugerindo um controle de expressão de ATPases dependente de metaciclogênese. Posteriormente, foi verificado pelas técnicas de RTPCR, e “Western blotting” que, a despeito da ocorrência de expressão de mRNA para as isoformas solúvel e de membrana de apirases nas promastigotas metacíclicas das três espécies estudadas, somente extratos enriquecidos de membrana de L. amazonensis foram capazes de apresentar reação com anticorpo anti-apirase de T. cruzi. O inóculo de promastigotas metacíclicas desse parasito na presença de suramina, um inibidor de ecto ATPases, em camundongos C57BL/6, levou a uma diminuição no tamanho de lesão a partir da quarta semana de infecção e no parasitismo em 7 semanas de infecção. Por outro lado, a indução de maior atividade 5’-nucleotidásica dos parasitos ou a administração simultânea de adenosina ao inóculo levou a um aumento transiente no tamanho de lesão e a um maior parasitismo em 3 ou 4 semanas de infecção da mesma cepa de camundongos por promastigotas metacíclicas de L. braziliensis, resultado oposto ao obtido após o tratamento, no momento do inóculo, com o bloqueador de receptores A2B de adenosina, MRS 1754. Em conjunto, esses resultados sugerem que a redução dos níveis de ATP extracelular pela ação de enzimas expressas pelo parasito e/ou a elevação dos níveis de adenosina podem contribuir para o estabelecimento de parasitos do gênero Leishmania no hospedeiro vertebrado, indicando um possível alvo para futuras intervenções de caráter terapêutico contra as leishmanioses.Item Interferência das terapias com doxiciclina e benznidazol nos parâmetros fisiológicos e inflamatórios cardíacos na infecção experimental por Trypanosoma cruzi.(2019) Carneiro, Ana Cláudia Alvarenga; Silva, André Talvani Pedrosa da; Silva, Breno de Mello; Costa, Daniela Caldeira; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Maldonado, Izabel Regina dos Santos Costa; Silva, Marcelo Eustáquio; Silva, André Talvani Pedrosa daA cardiopatia chagásica (CC) constitui a manifestação clínica mais importante da infecção pelo Trypanosoma cruzi. Terapias farmacológicas têm sido propostas com o objetivo de reduzir a resposta inflamatória e o dano cardíaco em hospedeiros infectados. Em particular, fármacos do grupo das tetraciclinas apresentam atividade anti-bacteriana, anti-fúngica e anti-protozoária em doses convencionais, mas em doses menores parecem atuar regulando a resposta inflamatória. O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação da doxiciclina - Dox (tetraciclina), em dose submicrobiana, em monoterapia e em combinação com o fármaco antiparasitário benznidazol (Bz), durante as fases aguda e crônica da infecção experimental por T cruzi, cepa VL-10, em camundongos C57BL/6. Os animais foram tratados por 20 dias com Dox (30 mg/Kg), Bz (100 mg/kg) e combinação (Dox + Bz) e a parasitemia foi realizada durante o período de tratamento/fase aguda. Estes animais foram acompanhados até a fase crônica (12 meses), quando realizou-se a ecocardiografia e posteriormente a eutanásia para a retirada de sangue/plasma para avaliação imunológica (CCL2, CCL5 e IL-10) e tecido cardíaco para a avaliação histopatológica. A Dox em monoterapia manteve os parâmetros parasitológicos e inflamatórios nos animais. Em vez disso, o Bz e a terapia combinada reduziram a parasitemia, os níveis plasmáticos de CCL2, CCL5 e a infiltração cardíaca durante a infecção aguda, além de reduzir os níveis plasmáticos de IL-10 e o volume sistólico do ventrículo esquerdo aos 12 meses. Entretanto, a Dox foi capaz de reduzir a massa do ventrículo esquerdo na fase crônica, enquanto o Bz em monoterapia reduziu os níveis plasmáticos de IL-10 durante a fase aguda e melhorou a fração de ejeção na fase crônica. Em suma, Dox não alternou os parâmetros imunológicos, mas melhorou a funcionalidade cardíaca, enquanto o Bz exerceu um papel modulador nos parâmetros imunológico, com efetividade parcial na melhora dos parâmetros cardíacos. Esses dados abrem perspectivas para que potenciais fármacos, como a Dox, atuem como futuros alvos terapêuticos, individualmente ou em combinação com outros fármacos, a fim de minimizar os danos causados durante a fase crônica da doença de Chagas.Item Intramuscular immunization with p36(LACK) DNA vaccine induces IFN-gama production but does not protect BALB/c mice against Leishmania chagasi intravenous challenge.(2005) Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Coelho, Eduardo Antônio Ferraz; Gomes, Daniel Cláudio de Oliveira; Vilela, Márcia de Carvalho; Masioli, Cássio Zumerle; Tavares, Carlos Alberto Pereira; Fernandes, Ana Paula Salles Moura; Afonso, Luís Carlos Crocco; Rezende, Simone AparecidaAcute visceral leishmaniasis is a progressive disease caused by Leishmania chagasi in South America. The acquisition of immunity following infection suggests that vaccination is a feasible approach to protect against this disease. Since Leishmania homologue of receptors for activated C kinase (LACK) antigen is of particular interest as a vaccine candidate because of the prominent role it plays in the pathogenesis of experimental Leishmania major infection, we evaluated the potential of a p36(LACK) DNA vaccine in protecting BALB/c mice challenged with L. chagasi. In this study, mice received intramuscular (i.m.) or subcutaneous (s.c.) doses of LACK DNA vaccine. We evaluated the production of vaccine-induced cytokines and whether this immunization was able to reduce parasite load in liver and spleen. We detected a significant production of interferon gamma by splenocytes from i.m. vaccinated mice in response to L. chagasi antigen and to rLACK protein. However, we did not observe a reduction in parasite load neither in liver nor in the spleen of vaccinated animals. The lack of protection observed may be explained by a significant production of IL-10 induced by the vaccine.Item Leishmania amazonensis impairs DC function by inhibiting CD40 expression via A2B adenosine receptor activation.(2012) Figueiredo, Amanda Braga de; Serafim, Tiago Donatelli; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Fernandes, José Roberto Meyer; Afonso, Luís Carlos CroccoDendritic cells (DCs) play an essential role in the modulation of immune responses and several studies have evaluated the interactions between Leishmania parasites and DCs. While extracellular ATP exhibits proinflammatory properties, adenosine is an important anti-inflammatory mediator. Here we investigated the effects of Leishmania infection on DC responses and the participation of purinergic signalling in this process. Bone marrowderived dendritic cells (BMDCs) from C57BL/6J mice infected with Leishmania amazonensis, Leishmania braziliensis or Leishmania major metacyclic promastigotes showed decreased major histocompatibility complex (MHC) class II and CD86 expression and increased ectonucleotidase expression as compared with uninfected cells. In addition, L. amazonensis-infected DCs, which had lower CD40 expression, exhibited a decreased ability to induce T-cell proliferation. The presence of MRS1754, a highly selective A2B adenosine receptor antagonist at the time of infection increased MHC class II, CD86 and CD40 expression in L. amazonensis-infected DCs and restored the ability of the infected DCs to induce T-cell proliferation. Similar results were obtained through the inhibition of extracellular ATP hydrolysis using suramin. In conclusion, we propose that A2B receptor activation may be used by L. amazonensis to inhibit DC function and evade the immune response.Item Leishmania metacyclogenesis is promoted in the absence of purines.(2012) Serafim, Tiago Donatelli; Figueiredo, Amanda Braga de; Costa, Pedro Augusto Carvalho; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Gonçalves, Ricardo; Moura, Sandra Aparecida Lima de; Gontijo, Nelder de Figueiredo; Silva, Sydnei Magno da; Michalick, Marilene Susan Marques; Fernandes, José Roberto Meyer; Carvalho, Roberto Paes de; Uliana, Silvia Reni Bortolin; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Afonso, Luís Carlos CroccoLeishmania parasites, the causative agent of leishmaniasis, are transmitted through the bite of an infected sand fly. Leishmania parasites present two basic forms known as promastigote and amastigote which, respectively, parasitizes the vector and the mammalian hosts. Infection of the vertebrate host is dependent on the development, in the vector, of metacyclic promastigotes, however, little is known about the factors that trigger metacyclogenesis in Leishmania parasites. It has been generally stated that ‘‘stressful conditions’’ will lead to development of metacyclic forms, and with the exception of a few studies no detailed analysis of the molecular nature of the stress factor has been performed. Here we show that presence/absence of nucleosides, especially adenosine, controls metacyclogenesis both in vitro and in vivo. We found that addition of an adenosine-receptor antagonist to in vitro cultures of Leishmania amazonensis significantly increases metacyclogenesis, an effect that can be reversed by the presence of specific purine nucleosides or nucleobases. Furthermore, our results show that proliferation and metacyclogenesis are independently regulated and that addition of adenosine to culture medium is sufficient to recover proliferative characteristics for purified metacyclic promastigotes. More importantly, we show that metacyclogenesis was inhibited in sand flies infected with Leishmania infantum chagasi that were fed a mixture of sucrose and adenosine. Our results fill a gap in the life cycle of Leishmania parasites by demonstrating how metacyclogenesis, a key point in the propagation of the parasite to the mammalian host, can be controlled by the presence of specific purines.Item Successful vaccination against Leishmania chagasi infection in BALB/c mice with freeze-thawed Leishmania antigen and Corynebacterium parvum.(2007) Vilela, Márcia de Carvalho; Gomes, Daniel Cláudio de Oliveira; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Serafim, Tiago Donatelli; Afonso, Luís Carlos Crocco; Rezende, Simone AparecidaThis study evaluated the potential of a Leishmania antigen vaccine in protecting BALB/c mice against Leishmania chagasi. Mice received two subcutaneous doses of L. amazonensis vaccine with Corynebacterium parvum and subsequent boost was done without adjuvant. One week later, mice were challenged with L. chagasi. We observed that this vaccine caused a significant reduction in parasite load in liver and spleen and induced a high production of IFN-_ and IL-4 by spleen cells from vaccinated mice in response to Leishmania antigen. Together, our data show that this vaccine is capable of inducing a Th1/Th2 response that is important to control parasite replication.Item The influence of ecto-nucleotidases on Leishmania amazonensis infection and immune response in C57B/6 mice.(2010) Testasicca, Miriam Conceição de Souza; Assis, Elisângela Aparecida de; Gomes, Rodrigo Saar; Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Melo, Maria Norma; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Afonso, Luís Carlos CroccoPrevious results from our laboratory and from the literature have implicated the expression of ectonucleotidases in the establishment of Leishmania infection. In the present study we evaluated the correlation between ecto-nucleotidasic activity and the infectivity of L. amazonensis promastigotes that were kept in culture for short or extended numbers of passages, a condition that is known to decrease parasite infectivity. We also analyzed the immune response associated with the infection by these parasites. As expected, we found that long-term cultured parasites induce the development of smaller lesions than the short-term cultured counterparts. Interestingly, long-term cultured parasites presented reduced ecto-nucleotidasic activity. In addition, cells recovered from animals infected with long-term cultured parasites produced higher amounts of IFN-_ and have smaller parasite load, after 8 weeks of infection. Furthermore, after 1 week of infection, there is increased expression of the chemokine CCL2 mRNA in animals infected with short-term cultured parasites. Finally, infection of peritoneal macrophages by these parasites also shows marked differences. Thus, while short-term cultured parasites are able to infect a greater proportion of macrophages, cells infected by long-term cultured parasites express higher amounts of CXCL10 mRNA, which may activate these cells to kill the parasites. We suggest that the enzymes involved in metabolism of extracellular nucleotides may have an important role in infection by L. amazonensis, by acting directly in its adhesion to target cells and by modulating host cell chemokine production.Item Utilização de DNA P36(LACK) na indução de resposta imune e na proteção contra infecção por Leishmania chagasi em camundongos BALB/C.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2004) Silva, Eduardo de Almeida Marques da; Resende, Simone AparecidaA leishmaniose visceral americana no Brasil é uma zooantroponose inicialmente restrita a áreas rurais e peri-urbanas. Com a emergência de novos focos em áreas urbanas, essa doença passou a ter influências significativas na saúde pública, e a vacinação é um importante mecanismo de proteção. Vários protocolos de vacinação vêm sendo testados para as diferentes formas de leishmaniose, e o uso de vacinas de DNA é uma alternativa interessante devido à sua capacidade de indução de imunidade celular prolongada. Além disso, essas vacinas estimulam respostas humorais, auxiliares e citotóxicas, sendo as duas últimas muito importantes para a indução de uma resposta protetora em modelos murinos de leishmaniose visceral. A LACK (homóloga de Leishmania de receptores de proteína quinase C ativada) é uma proteína de 36 kDa altamente conservada entre as diferentes espécies e formas evolutivas de Leishmania, e induz proteção contra infecção cutânea por L. major por intermédio do redirecionamento da resposta patogênica (Th2) para a protetora (Th1), quando administrada como a versão reduzida de 24 kDa. Sua eficácia como antígeno em vacinações contra L. chagasi ainda não foi avaliada. Nós testamos, então, uma vacina de DNA que codifica o gen p36(LACK) (DNA p36(LACK)), administrada pela via intramuscular ou subcutânea, objetivando avaliar seu potencial imunogênico e protetor e sua capacidade de indução de resposta imune prolongada contra L. chagasi. Nossos resultados demonstraram que a vacinação com DNA p36(LACK) pela via intramuscular induz uma resposta do tipo 1 (produção de IFN-, mas não de IL-4) quando esplenócitos de camundongos vacinados, mas não desafiados, são estimulados com antígenos de L. chagasi (50, 100 ou 150 g/mL de antígeno solúvel ou 50 g/mL de antígeno particulado) ou proteína p36(LACK) recombinante (5 g/mL). Não houve produção de TNF ou de óxido nítrico por esses esplenócitos. O mesmo não foi observado quando se utilizou a via subcutânea de imunização, onde não se detectou produção de nenhuma das citocinas ou de óxido nítrico pelos esplenócitos submetidos aos mesmos estímulos. A produção significativa de IFN-por esplenócitos estimulados de camundongos vacinados pela via intramuscular e submetidos a desafio endovenoso com promastigotas de L. chagasi 4 ou 12 semanas após a dose de reforço demonstrou a capacidade da vacina de garantir resposta imune prolongada. Entretanto, não houve diminuição de carga parasitária hepática ou esplênica de camundongos vacinados em relação aos controles, demonstrando que a resposta imune induzida pela vacina foi insuficiente para proteger esses camundongos contra o desafio sistêmico, considerando-se quaisquer das vias de vacinação utilizadas. Portanto, a vacina de DNA p36(LACK) administrada pela via intramuscular se mostrou imunogênica e capaz de induzir resposta imune do tipo 1 prolongada, mas não foi capaz de induzir proteção contra desafio sistêmico por L. chagasi.