Navegando por Autor "Carvalho, Fernanda Machado de"
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Item Carbonyl cyanidem - chlorophenylhydrazone induced calcium signaling and activation of plasma membrane H1-ATPase in the yeast Saccharomyces cerevisiae.(2008) Pereira, Michele B. P.; Tisi, Renata; Fietto, Luciano Gomes; Cardoso, Anamaria de Souza; França, Mônica M.; Carvalho, Fernanda Machado de; Trópia, Maria José Magalhães; Martegani, Enzo; Castro, Ieso de Miranda; Brandão, Rogélio LopesThe plasma membrane H1-ATPase from Saccharomyces cerevisiae is an enzyme that plays a very important role in the yeast physiology. The addition of protonophores, such as 2,4-dinitrophenol (DNP) and carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP), also triggers a clear in vivo activation of this enzyme. Here, we demonstrate that CCCP-induced activation of the plasma membrane H1-ATPase shares some similarities with the sugar-induced activation of the enzyme. Phospholipase C and protein kinase C activities are essential for this activation process while Gpa2p, a G protein involved in the glucose-induced activation of the ATPase, is not required. CCCP also induces a phospholipase Cdependent increase in intracellular calcium. Moreover, we show that the availability of extracellular calcium is required for CCCP stimulation of H1-ATPase, suggesting a possible connection between calcium signaling and activation of ATPase.Item Participação de componentes do metabolismo do fosfatidilinositol no controle de vias de sinalização induzidas por glicose em Saccharomyces cerevisiae.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. CIPHARMA, Escola de Farmácia, Universidade Federal de Ouro Preto., 2007) Carvalho, Fernanda Machado de; Brandão, Rogélio LopesTrabalhos realizados pelo nosso grupo de pesquisa demonstraram que a ativação, induzida por glicose, da H + -ATPase de membrana citoplasmática em S. cerevisiae é dependente do cálcio extracelular e da ação da proteína Pkc1p, além disso, o metabolismo do fosfatidilinositol parece estar envolvido nesse processo: uma cepa de levedura (PJ69-2a) contendo a deleção do gene ARG82, que codifica uma quinase IP3-IP4 específica, possui altos níveis de IP3, que controlam os níveis de cálcio citosólico livre. Este estudo, também, mostrou que esse mutante não crescia na presença de galactose. Decidimos, então, analisar o crescimento celular em diferentes fontes de carbono de cepas que apresentavam deleção de genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo do fosfatidilinositol. Somente o mutante arg82D não apresentou crescimento em fontes alternativas de carbono. Verificamos, ainda que o mesmo não apresenta a segunda fase de crescimento celular, possui problemas na desrepressão de genes controlados por glicose e confirmamos novamente a participação de Arg82p na ativação da H + -ATPase. Esses resultados são semelhantes àqueles já demonstrados por outros trabalhos de nosso grupo de pesquisa para o mutante pkc1Δ. Recentemente, adquirimos a coleção de cepas mutantes EUROSCARF, apresentando deleções individuais em vários genes; decidimos então averiguar se o mutante arg82D dessa coleção apresentaria os mesmos resultados do mutante com o qual vínhamos trabalhando. De forma intrigante, eles foram diferentes. Diante desse fato, uma vez que se tratava realmente dos mutantes arg82D, o que foi confirmado por reações de PCR, deletamos novamente o gene ARG82na cepa selvagem PJ69-2a. Além disso, construímos cepas de leveduras que apresentavam a deleção do gene ARG82em associação com deleções de genes que codificam proteínas envolvidas no metabolismo de IP3e cálcio e analisamos seus fenótipos. Nossos resultados sugerem que um fator específico do “background” PJ69-2a – uma possível superexpressão ou mutação do gene YVC1, codificante para um canal de cálcio vacuolar - em associação com um papel direto ou indireto de Arg82p são responsáveis pelo envolvimento do metabolismo do fosfatidilinositol na desrepressão de genes controlados por glicose, metabolismo de fontes de carbono e ativação, induzida por glicose, da H + -ATPase.