Navegando por Autor "Cardoso, Anamaria de Souza"
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Item Calcium signaling and sugar-induced activation of plasma membrane H+-ATPase in Saccharomyces cerevisiae cells.(2006) Trópia, Maria José Magalhães; Cardoso, Anamaria de Souza; Tisi, Renata; Fietto, Luciano Gomes; Fietto, Juliana Lopes Rangel; Martegani, Enzo; Castro, Ieso de Miranda; Brandão, Rogélio LopesIn this work, we show that glucose-induced activation of plasma membrane H+-ATPase from Saccharomyces cerevisiae is strongly dependent on calcium metabolism and that the glucose sensor Snf3p works in a parallel way with the G protein Gpa2p in the control of the pathway. The role of Snf3p is played by the Snf3p C-terminal tail, since in a strain with the deletion of the SNF3 gene, but also expressing a chimera protein formed by Hxt1p (a glucose transporter) and the Snf3p C-terminal tail, a normal glucose-activation process can be observed. We present evidences indicating that Snf3p would be the sensor for the internal signal (phosphorylated sugars) of this pathway that would connect calcium signaling and activation of the plasma membrane ATPase. We also show that Snf3p could be involved in the control of Pmc1p activity that would regulate the calcium availability in the cytosol.Item Carbonyl cyanidem - chlorophenylhydrazone induced calcium signaling and activation of plasma membrane H1-ATPase in the yeast Saccharomyces cerevisiae.(2008) Pereira, Michele B. P.; Tisi, Renata; Fietto, Luciano Gomes; Cardoso, Anamaria de Souza; França, Mônica M.; Carvalho, Fernanda Machado de; Trópia, Maria José Magalhães; Martegani, Enzo; Castro, Ieso de Miranda; Brandão, Rogélio LopesThe plasma membrane H1-ATPase from Saccharomyces cerevisiae is an enzyme that plays a very important role in the yeast physiology. The addition of protonophores, such as 2,4-dinitrophenol (DNP) and carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone (CCCP), also triggers a clear in vivo activation of this enzyme. Here, we demonstrate that CCCP-induced activation of the plasma membrane H1-ATPase shares some similarities with the sugar-induced activation of the enzyme. Phospholipase C and protein kinase C activities are essential for this activation process while Gpa2p, a G protein involved in the glucose-induced activation of the ATPase, is not required. CCCP also induces a phospholipase Cdependent increase in intracellular calcium. Moreover, we show that the availability of extracellular calcium is required for CCCP stimulation of H1-ATPase, suggesting a possible connection between calcium signaling and activation of ATPase.Item Efeitos das variações na homeostase de cálcio, sobre o processo de ativação, induzido por carboidratos, da H+- ATPase de membrana citoplasmática de Saccharomyces cerevisiae : papel do cálcio externo e do canal vacuolar Yvc1p.(Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto., 2009) Cardoso, Anamaria de Souza; Brandão, Rogélio LopesA H+-ATPase de membrana plasmática de Saccharomyces cerevisiae é uma enzima muito importante, pois pelo bombeamento de prótons para fora da célula, ela cria um gradiente eletroquímico que é essencial para a captação de nutrientes. A presença de glicose desencadeia modificações pós-traducionais que aumentam a atividade da H+-ATPase. Trabalhos realizados em nosso laboratório demonstraram que a ativação da enzima, induzida por glicose, é dependente do metabolismo de cálcio e que nesta via, o sensor Snf3p, parece atuar de forma paralela a Gpa2p, e que sua cauda C-terminal é aparentemente responsável por este papel. Neste trabalho, nós observamos que em baixas concentrações de cálcio externo, o sinal de cálcio, e consequentemente a ativação induzida por glicose, da H+- ATPase de membrana plasmática, é independente da atividade de proteínas responsáveis pela captação de cálcio em S. cerevisiae. Nesta condição, as células parecem ser capazes de detectar as baixas concentrações de cálcio externo e de alguma forma controlar a atividade da Ca2+- ATPase vacuolar, Pmc1p. Nós apresentamos dados que sugerem que Yvc1p, um canal de cálcio de membrana vacuolar está envolvido no sinal de cálcio induzido por glicose em células de levedura. Além disso, trabalhando com a droga 2-aminoetoxidifenil borato (2-APB), um modulador de receptores de IP3 em células de mamíferos, fomos capazes de demonstrar que provavelmente o Yvc1p funcione como um receptor de IP3 ou pelo menos responda a um componente, ainda desconhecido, sensível ao mesmo, no sinal de cálcio induzido por açúcar. Nossos resultados também sugerem que Snf3p deve regular negativamente a atividade da Ca2+- ATPase, Pmc1p, inibindo o sequestro de cálcio citosólico. Investigando os braços paralelos que regulam nossa via de estudo, observamos no duplo mutante snf3Δplc1Δ, surpreendentemente, uma reversão dos fenótipos observados nos mutantes únicos. Este comportamento pode ser explicado pelo fato de que neste mesmo duplo mutante há uma ausência de acúmulo de cálcio e então as condições de concentração e localização deste íon sejam favoráveis a uma ativação normal da H+-ATPase . Finalmente, nós demonstramos que a proteína quinase C parece estar envolvida no sinal de cálcio induzido por açúcar em células de levedura. Muito provavelmente ela participe do controle da H+-ATPase de membrana plasmática pela regulação dos níveis de cálcio e não pela fosforilação direta da enzima.Item The involvement of calcium carriers and of the vacuole in the glucose-induced calcium signaling and activation of the plasma membrane H+-ATPase in Saccharomyces cerevisiae cells.(2012) Bouillet, Leoneide Érica Maduro; Cardoso, Anamaria de Souza; Perovano, Eduardo; Pereira, R. R.; Ribeiro, Erica Milena de Castro; Trópia, Maria José Magalhães; Fietto, Luciano Gomes; Tisi, Renata; Martegani, Enzo; Castro, Ieso de Miranda; Brandão, Rogélio LopesPrevious work from our laboratories demonstrated that the sugar-induced activation of plasma membrane H+-ATPase in Saccharomyces cerevisiae is dependent on calcium metabolism with the contribution of calcium influx from external medium. Our results demonstrate that a glucose-induced calcium (GIC) transporter, a new and still unidentified calcium carrier, sensitive to nifedipine and gadolinium and activated by glucose addition, seems to be partially involved in the glucose-induced activation of the plasma membrane H+-ATPase. On the other hand, the importance of calcium carriers that can release calcium from internal stores was analyzed in glucose-induced calcium signaling and activation of plasma membrane H+-ATPase, in experimental conditions presenting very low external calcium concentrations. Therefore the aim was also to investigate how the vacuole, through the participation of both Ca2+-ATPase Pmc1 and the TRP homologue calcium channel Yvc1 (respectively, encoded by the genes PMC1 and YVC1) contributes to control the intracellular calcium availability and the plasma membrane H+-ATPase activation in response to glucose. In strains presenting a single deletion in YVC1 gene or a double deletion in YVC1 and PMC1 genes, both glucose-induced calcium signaling and activation of the H+-ATPase are nearly abolished. These results suggest that Yvc1 calcium channel is an important component of this signal transduction pathway activated in response to glucose addition. We also found that by a still undefined mechanism Yvc1 activation seems to correlate with the changes in the intracellular level of IP3. Taken together, these data demonstrate that glucose addition to yeast cells exposed to low external calcium concentrations affects calcium uptake and the activity of the vacuolar calcium channel Yvc1, contributing to the occurrence of calcium signaling connected to plasma membrane H+-ATPase activation.