Análise proteômica comparativa de amostras de Trypanosoma cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI, isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica.
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Data
2017
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Resumo
O Trypanosoma cruzi é um parasito da ordem Kinetoplastida, agente etiológico da doença
de Chagas (DCh), uma enfermidade de evolução crônica progressiva que afeta os sistemas
cardiovascular, gastrointestinal e nervoso do hospedeiro humano. Esse protozoário é um
parasito intracelular obrigatório que apresenta quatro estágios evolutivos: formas
epimastigotas e tripomastigotas metacíclicas no sistema digestivo do inseto vetor; formas
amastigotas (intracelulares) e tripomastigotas sanguíneas que parasitam o hospedeiro
mamífero. A espécie está subdividida em seis genótipos distintos ou discret typing units
(DTUs), nomeados TcI a TcVI, e TcBat. Vários estudos foram conduzidos visando
correlacionar a variabilidade genética do T. cruzi com sua biologia e as manifestações
clínicas da DCh, e a proteômica representa uma abordagem interessante para estudar
mudanças globais na expressão de proteínas entre os diferentes genótipos. O objetivo deste
trabalho foi caracterizar alguns parâmetros biológicos por meio de ensaios in vitro e realizar
a análise proteômica quantitativa de amostras de T. cruzi pertencentes aos genótipos TcII e
TcVI isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica, provenientes do Vale do
Jequitinhonha, MG. Para este fim, cada amostra de T. cruzi foi cultivada em meio LIT para
determinação da curva de crescimento ao longo de 20 dias. A taxa de metaciclogênese foi
avaliada em meio Grace. Células “Vero” foram infectadas com tripomastigotas obtidas da
diferenciação em meio Grace para avaliar as taxas de infectividade e de multiplicação
intracelular de cada amostra nos tempos de 24, 48 e 72 horas de cultivo. Os proteomas das
três amostras de epimastigotas de T. cruzi (1107 – TcII, 229 e 2119 – TcVI; em fase
exponencial) foram analisados por nano-UHPLC-MS/MS. Para identificação, quantificação
label free e comparação das proteínas, foi utilizado o software PEAKS, versão 8, e a
categorização das proteínas foi realizada pelo software Blas2GO versão 4.1. Os resultados
obtidos revelaram diferenças significativas entre os genótipos TcII e TcVI. A amostra do
genótipo TcII apresentou maior área sob a curva na análise do crescimento em meio LIT,
enquanto as taxas de metaciclogênese, infectividade e desenvolvimento intracelular foram
maiores nas amostras do grupo genético TcVI. A análise proteômica shotgun permitiu a
identificação de 3833 proteínas, dentre as quais 212 exibiram expressão diferencial. Dessas
proteínas, a maioria encontrava-se com a expressão aumentada nos isolados do genótipo
TcVI. Este trabalho permitiu apontar diferenças biológicas e metabólicas importantes entre
os isolados investigados e a identificação de possíveis assinaturas proteicas dos genótipos
TcII e TcVI.
Descrição
Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa de Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto.
Palavras-chave
Tripanosoma cruzi, Doença de Chagas, Proteômica
Citação
INÁCIO, Luciana de Jesus. Análise proteômica comparativa de amostras de Trypanosoma cruzi pertencentes aos genótipos TcII e TcVI, isoladas de pacientes com doença de Chagas crônica. 2017. 113 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) – Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Ouro Preto, Ouro Preto, 2017.