Desenvolvimento, caracterização e avaliação de nanoestruturas contendo fotosensitizador para o tratamento de lesões malignas e potencialmente malignas em modelos experimenteis.

Abstract

Neste trabalho o fotossensitizador, cloro alumínio ftalocianina (AlClPc), foi incorporado em diferentes sistemas coloidais: nanocápsulas (NC) convencionais de ácido poli-D,L-lático (PLA), NC estericamente estabilizadas ou peguiladas com monometoxipolietilenoglicol-co-poli-D,L-lactídeo (PLA-PEG) e em nanoemulsões (NE) aniônicas e catiônicas utilizando-se a metodologia de precipitação seguida de evaporação do solvente. NC de PLA e PLA-PEG contendo AlClPc foram desenvolvidas e caracterizadas para o tratamento intravenoso de tumores sólidos em modelo animal usando a terapia fotodinâmica (TFD). As preparações de NC contendo AlClPc mostraram estreita distribuição de tamanho (monodispersão) com um índice de polidispersão médio de 0,13. O diâmetro médio, determinado por espectroscopia de correlação de fótons (ECF), variou em torno de 200 nm conforme a formulação e todas as formulações apresentaram potencial zeta negativo. A porcentagem de encapsulação de AlClPc foi próxima de 100% para todas as formulações. O perfil de liberação foi investigado para as nanoestruturas e foi observada uma liberação prolongada por 168 horas. A hemólise induzida pelo AlClPc livre ou pelo AlClPc-NC PLA foi baixa (< 10%), sendo que as NC PLA-PEG contendo AlClPc induziram maior hemotoxicidade (máximo de 37 %). A atividade antitumoral de AlClPc livre e incorporado em NC PLA e NC PLA-PEG foi avaliada em modelo murino de tumor sólido de Ehrlich, nas doses de 0,5 e 6,0 mg/kg de AlClPc e na dose de luz de 50 J/cm2. Os grupos controles apresentaram padrões macroscópicos e histológicos similares, enquanto, os tratados por terapia fotodinâmica induziram 70% e 68% de necrose no tumor após uma única aplicação de NC PLA e NC PLA-PEG nas doses mais altas de AlClPc, respectivamente, mostrando eficácia de NC-AlClPc no tratamento experimental por PDT em nosso modelo animal. Por outro lado, NE e NC aniônicas e catiônicas foram desenvolvidas e caracterizadas para utilização no tratamento tópico de desordens potencialmente malignas da mucosa oral, visando aplicações no tratamento futuro da leucoplasia. Nanoestruturas catiônicas compostas de estearilamina (EA) ou dodecilamina (DA) foram preparadas por nanoemulsificação espontânea. O procedimento resultou em NE monodispersas com diâmetro médio das gotículas de aproximadamente 273 nm. NC também foram preparadas e comparativamente apresentaram tamanho médio muito semelhante (263 nm). As nanoestruturas compostas de DA e EA apresentaram um potencial zeta de +17 e +76 mV, respectivamente. AlClPc-carregada em nanoestruturas catiônicas exibiram porcentagem de encapsulação de 100%. A porcentagem de AlClPc liberada in vitro de NC EA e NE EA foi de 13% e 15%, respectivamente, após 156 horas. A hemólise induzida por nanoestruturas catiônicas apresentou-se aumentada em relação às nanoestruturas aniônicas. Ambas foram também caracterizadas quanto a penetração in vivo de AlClPc através da mucosa da língua e bolsa de hamster, sendo as mucosas analisadas por microscopia confocal. Entretanto, a NE catiônica preparada com dodecilamina apresentou menor penetração na mucosa quando comparado às demais formulações. Estudos de permeação e retenção in vitro foram realizados utilizando-se mucosa da bolsa jugal de hamster com leucoplasia induzida por 7, 12- dimetilbenzoantraceno (DMBA). Os estudos de permeação e retenção in vitro demonstraram que o AlClPc incorporado à NE e mesmo em solução consegue penetrar até as camadas viáveis da mucosa com leucoplasia induzida, permanecendo retido mesmo após 6 horas de sua aplicação. Os resultados obtidos sugerem, portanto, que as nanopartículas contendo AlClPc são um sistema de vetorização promissor para aplicações clínicas na TFD em alterações potencialmente malignas, como a leucoplasia oral.