Isolamento biomonitorado de ativos tóxicos das folhas de Annona crassiflora Mart. e eficácia antimalárica do alcaloide norestefalagina em nanoemulsões.

Abstract

Neste trabalho foi realizado o estudo biomonitorado da toxicidade de frações e metabólitos secundários isolados das folhas de Annona crassiflora Mart., planta conhecida popularmente como araticum ou marolo. Além disso, foi investigada a atividade antimalárica dos compostos isolados e veiculados em nanoemulsões. O fracionamento do extrato etanólico, obtido de suas folhas, foi biomonitorado através do teste de letalidade sobre as larvas de Artemia salina, para a seleção de frações potenciais para obtenção de substâncias bioativas. O fracionamento do extrato etanólico bruto foi realizado através de extração ácida e métodos cromatográficos “flash” e CLAE-PDA. As frações obtidas foram submetidas à prospecção fitoquímica, com reagentes e reveladores para identificação das classes de metabólitos secundários, que levaram à detecção de alcaloides nas frações clorofórmicas (ACF-CI e ACF-CII). Foi isolado o alcaloide majoritário norestefalagina (NOR). Sua identificação foi realizada através de métodos espectrométricos como UV, IV, RMN de 1H e de 13C, DEPT 135, mapas de contornos COSY, HSQC, HMBC e NOESY. Foi também desenvolvido e validado um método CLAE-PDA para quantificação da NOR em nanoemulsões, através da avaliação da linearidade, precisão, exatidão, seletividade e limites de quantificação e detecção para a metodologia escolhida. Nanoemulsões contendo NOR (NE-NOR) foram produzidas e apresentaram tamanho e índice de polidispersão inferiores a 300nm nas concentrações entre 0,1 e 1,0 mg/mL. O potencial zeta das NE foi determinado, mas não foram observadas diferenças significativas entre as formulações testadas, estando todas em torno de -50 mV. A eficiência de encapsulação determinada foi de 22,0; 45,6 e 44,9% nas concentrações de 1,0; 2,0 e 5,0 mg/mL, respectivamente. As NE-NOR nas concentrações de 0,1 e 0,5 mg/mL apresentaram estabilidade de nove meses considerando os parâmetros físico-químicos avaliados. Na determinação da atividade hemolítica da NOR, foi constatado que esta foi inferior a 10% nas concentrações de 0,5 e 2,0 μg/mL. No ensaio de atividade antimalárica, a NOR em solução nas doses de 4,0; 8,0 e 20,0 mg/kg por via intraperitoneal reduziu significativamente (68 a 83%) a parasitemia dos camundongos infectados pelo Plasmodium berghei NK65 no quarto dia de infecção, quando comparada ao grupo controle não tratado. A redução da parasitemia foi de 80 a 84% para a NOR encapsulada nas nanoemulsões nas mesmas concentrações. A formulação de NE-NOR (4 mg/kg) apresentou maior redução da parasitemia ao longo do estudo, revelando seu efeito inibitório tardio sobre a carga parasitária dos animais.