Varredura de uma biblioteca de cDNA da aranha Lasiodora sp utilizando-se de antisoro policlonal anti-veneno total e clonagem das seqüências codificantes para LTx1 e LTx3 no vetor de expressão bacteriano pET-11a.

Abstract

Venenos de aranhas são sistemas de multicomponentes que podem ser agrupados em 3 classes químicas principais: moléculas orgânicas de baixo peso molecular, peptídeos e proteínas de alto peso molecular. A grande maioria de toxinas de aranhas identificadas até o momento é composta de polipeptídeos com uma massa molecular de 3000-8000 Da altamente reticulados por pontes dissulfeto. A purificação de peptídeos tóxicos de venenos de aranhas nos propicia um arsenal de ferramentas moleculares para estudos eletrofisiológicos, farmacológicos e estudo de canais iônicos. Este trabalho descreve o resultado da varredura de uma biblioteca de cDNA, utilizando-se da técnica de ELISA, com o objetivo de identificar proteínas imunogênicas. A biblioteca de cDNA foi construída a partir do mRNA isolado de glândulas de veneno de Lasiodora sp. Anti-soro contra o veneno total foi usado na varredura. Os clones positivos foram caracterizados por seqüenciamento de DNA. Nossos resultados mostram que os precursores das toxinas descritas apresentam um peptídeo sinal caracterizado por um alto conteúdo de aminoácidos hidrofóbicos, um propeptídeo interposto entre a seqüência sinal e a toxina madura, e a seqüência de aminoácidos da toxina madura. Os cDNAs que codificam as toxinas LTx1 e LTx3 foram inseridos no vetor de expressão pET-11a, gerando plasmídeos com a capacidade de codificar as toxinas maduras. O sistema pET-11a-LTx1 produziu a toxina LTx1 recombinante na forma solúvel.