Nanoparticulas bioadesivas para administração intramamária : desenvolvimento, caracterização fisico-química, cinética de liberação e avaliação biológica ex vivo.

Abstract

Este trabalho trata do desenvolvimento farmacotécnico e da caracterização físico-química de formulações nanoestruturadas destinadas ao encapsulamento de cloxacilina benzatina, um antimicrobiano de uso veterinário. Objetivou-se a otimização de formulações estáveis de nanocápsulas (NC) e nanoesferas (NS) contendo o polímero poli-ε-caprolactona (PCL) e revestidas com quitosana (QUI), um polímero com carga positiva, a fim de se obter uma formulação com capacidade bioadesiva de administração intramamária da cloxacilina benzatina (CloxB). A distribuição de tamanho médio das nanopartículas (NP) e o índice de polidispersão foram determinados por espectroscopia de correlação de fótons e a morfologia por microscopia de força atômica. A carga superficial foi determinada por anemometria de laser Doppler associada à microeletroforese. A associação do fármaco às nanoestruturas e a cinética de liberação in vitro foram determinados por duas diferentes técnicas de diálise e o fármaco quantificado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As suspensões de nanocápsulas e de nanoesferas foram preparadas pelo método de deposição interfacial de polímeros pré-formados seguido de evaporação do solvente, conhecido como nanoprecipitação. Foram avaliadas as influências de polímeros (quitosana e poli-ε-caprolactona), de tensoativos (lecitina e tween 80), do tipo de óleo e do volume final sobre as características físico-químicas das suspensões coloidais. Foram obtidas formulações de nanopartículas estáveis e monodispersas no encapsulamento da CloxB. A variação na proporção de polímeros (0,5-2,0% de PCL e 0,05-1,0% de QUI) e a ausência de surfactantes conduziram a uma alteração significativa no tamanho das partículas. Para as NP otimizadas foi observado que o aumento na concentração do fármaco influencia significativamente (p<0,05) sua carga superficial (variação de +52 a -3,5 mV para NS e de +41,3 a -28,2 mV para NC) e leva a uma redução na estabilidade da partícula e aumento do tamanho médio (variação de 230,8 a 897,2 nm para NS e de 263,7 a 429,1nm para NC). Essa alteração na carga superficial compromete a estabilidade da suspensão coloidal e induz a agregação. A encapsulação máxima de CloxB nas NP foi de 3 mg/mL sem causar efeitos de redução da eficiência de encapsulação e instabilidade do colóide. O estudo de solubilidade da CloxB em diferentes meios mostrou elevada solubilidade em tampão fosfato salino (PBS) (0,713 mg/mL) e em meio PBS contendo 70% de leite (1,071 mg/mL). A liberação do fármaco a partir das nanoestruturas em 6h foi de 80% no meio PBS, entretanto em 48h somente 70% foi liberado na presença de 70% de leite no meio.. Os melhores resultados no processo de liofilização das NP de CloxB ocorreram na condição de congelamento a -196ºC com o uso de 25% (p/p) de sacarose. Foi feito um estudo de distribuição de NC em glândula mamária bovina, utilizando QUI marcada com fluoresceína. As imagens mostraram ampla distribuição da NC na glândula, indicando que as nanoparticulas podem apresentar propriedades de bioadesividade, mesmo nas regiões proximais do úbere (15 cm da base do teto). Foi também realizado o desenvolvimento e a validação da metodologia analítica para doseamento do estolato de eritromicina por CLAE, outro antibiótico utilizado no tratamento da mastite bovina, com objetivo de encapsulamento. O método validado foi preciso (CV intradia de 013-1,56% e CV interdia de 0,37-2,16%) e exato (98,85-104,06%). O estudo de porcentagem e eficiência de encapsulação do estolato de eritromicina foi realizado na concentração de 1,0 mg/mL de fármaco em NS e NC, conforme formulação otimizada. Os resultados mostraram uma porcentagem de encapsulação de 43,30% nas NS e 44,25% nas NC e uma eficiência de encapsulação de 38,83% e 43,07%, respectivamente. Este estudo demonstrou a viabilidade e o potencial interesse no uso de sistemas nanométricos para encapsulação de antibióticos de administração intramamária no tratamento da mastite bovina.