Desenvolvimento de um protótipo de kit para diagnóstico da leishmaniose visceral canina empregando a citometria de fluxo.

Abstract

A leishmaniose visceral encontra-se em expansão em alguns centros urbanos sendo importante destacar o papel dos cães como reservatório da doença. Assim, o controle da leishmaniose visceral canina (LVC) torna-se relevante, sendo as ações preconizadas pelo ministério da saúde baseadas num tripé de ações que sugerem o tratamento dos casos humanos, combate ao vetor e a eutanásia dos cães soropositivos. No entanto, devido à limitação na eficiência dos testes de diagnósticos atualmente empregados (RIFI e ELISA), a eliminação destes cães torna-se cada vez mais difícil e questionável. Neste contexto, o presente projeto propôs desenvolver e validar um protótipo de kit de diagnóstico pela pesquisa de anticorpos anti-Leishmania fixada através da técnica de citometria de fluxo. Para cumprir com o objetivo, foram utilizados soros de cães naturalmente infectados, portadores de diferentes formas clínicas, provenientes da área endêmica de Belo Horizonte, e soros de cães não infectados do Centro de Ciência Animal (CCA) da UFOP. Na primeira etapa deste projeto, houve a produção de promastigotas de L. infantum que, em seguida, foram preservadas em diferentes conservantes (Fenol 0.35%, Formol 0.5%, Thimerosal 0.01% e controle PBS) e em diferentes condições de temperatura (25°C, 4°C e -20°C). Na etapa seguinte, a etapa de validação dos antígenos, foram realizadas avaliações mensais das condições de rendimento reacional, aspectos morfológicos e microbiológicos das diferentes preparações antigênicas. Estas análises revelaram que a condição ideal de preservação dos antígenos de L. infantum a serem empregados no protótipo de kit é a fixação por formol 0,5% e acondicionamento em geladeira. A última etapa deste estudo avaliou os índices de desempenho do protótipo empregando o suporte antigênico conservado em formol 0,5% e estocado em geladeira. Os resultados observados revelaram um excelente potencial do protótipo no diagnóstico da LVC, com valores de sensibilidade igual a 95%, especificidade de 100%, valor preditivo positivo de 100%, valor preditivo negativo igual a 83,3% e a acurácia do teste foi estimada em 96%. Desta forma, a partir deste trabalho, torna-se disponível uma nova alternativa para o diagnóstico sorológico da LVC, que poderá ser empregada em campanhas de controle da doença no Brasil.