Avaliação em larga escala do Kit LeishFlow para o diagnóstico sorológico da Leishmaniose Visceral Canina.

Abstract

A Leishmaniose Visceral (LV) é uma zoonose que apresenta grande distribuição mundial e integra o grupo de doenças tropicais negligenciadas da Organização Mundial de Saúde. No Brasil, o cão tem um papel importante na disseminação da LV e o diagnóstico preciso da doença canina é essencial para o controle da enfermidade. Atualmente, o protocolo de diagnóstico conta com dois principais testes, o TR-DPP® e EIE-LVC, que apresentam limitações, entre elas se destacam: reações cruzadas com outros patógenos caninos, baixa sensibilidade na detecção de cães assintomáticos e ocorrência de resultados falso-positivos em animais vacinados. Em consequência dessas limitações, há uma falha na rápida identificação de animais nas áreas endêmicas, comprometendo as medidas de controle. Em busca de melhorias no diagnóstico da doença canina, o uso de técnicas mais sensíveis, como a citometria de fluxo é uma opção, pois apresenta um alto desempenho e melhor detecção de animais com baixo título de anticorpos. Nosso grupo de pesquisa desenvolveu nos últimos anos um protótipo de kit, denominado LeishFlow, para o diagnóstico sorológico por citometria de fluxo da Leishmaniose Visceral Canina (LVC). em que obtivemos bons resultados iniciais. Para aprofundarmos e aprimorarmos o desenvolvimento biotecnológico do Kit LeishFlow, neste estudo produzimos e revalidamos um novo lote do Kit, avaliamos o desempenho do novo kit em larga escala e comparamos a eficácia do emprego do LeishFlow como teste único para o diagnóstico da LVC em paralelo aos testes preconizados pelo Ministério da Saúde (MS). Os testes foram realizados em uma ampla variedade de soros caninos (n = 1.546), estes coletados em uma área de alta endemicidade, desta forma, estabelecemos a concordância entre os testes diagnósticos e a prevalência mais realística da doença com um teste de melhor sensibilidade e especificidade. O uso do Kit LeishFlow sozinho resultou em melhora diagnóstica, ao analisarmos a prevalência da área endêmica estudada observamos que o TR-DPP® e EIE-LVC apresentaram um valor de 18,24%, já o LeishFlow apresentou uma prevalência de 29,43%. Nossos resultados mostram que o LeishFlow tem um alto potencial como teste diagnóstico único, e pode descriminar os animais infectados de não infectados para L. infantum, apresentando um valor de sensibilidade (88,3%) e especificidade (83,7%), quando referenciado pelos testes TR-DPP® e EIE-LVC, e uma concordância de 84,5%. Demonstrou bons resultados ao estratificar animais por sintomatologia, nos cálculos de sensibilidade (95,1%), especificidade (72,1%) e acurácia (85%) dos animais sintomáticos e para animais assintomáticos apresentou sensibilidade de 87,1% e especificidade de 84,7%, e acurácia de 82,3% quando utilizados os testes padrão de referência do MS. O LeishFlow, por ser mais sensível e específico, melhoraria a detecção de animais positivos nas áreas endêmicas, e por ser um teste único, diminuiria os custos operacionais, a rapidez no diagnóstico e assim nas ações de controle, o que torna essa metodologia uma alternativa para o diagnóstico sorológico da LVC. Além disso, mais opções de teste de diagnóstico é essencial para laboratórios privados e serviços veterinários no Brasil, dada a crescente demanda e impacto na saúde pública causado pela LVC.